Caratterizzazione dell’interazione tra il neuropeptide VIP e il recettore di membrana CRTH2

Eosinophilic esophagitis is a chronic inflammatory disease involving several cellular mediators, including the membrane receptor CRTH2 and the neuropeptide VIP (vasoactive intestinal peptide). The aim of this work was to confirm, investigate, and quantify the interaction between CRTH2 and VIP through cellular assays. To this end, complementary experimental approaches were employed: Western blot and Cellular Thermal Shift Assay (CETSA) to characterize protein expression and stability in the presence of a potential ligand, and the PRESTO-TANGO system, a platform for analyzing downstream activation specific to GPCRs. The results obtained confirmed the direct interaction between VIP and CRTH2, highlighting that VIP acts as a competitive antagonist on the β-arrestin–mediated pathway of CRTH2. These findings pave the way for further studies through protein purification and the use of highly sensitive techniques such as Surface Plasmon Resonance (SPR), with the ultimate goal of identifying and developing potential pharmacological antagonists capable of blocking this interaction and preventing disease onset.

L’esofagite eosinofila è una patologia infiammatoria cronica in cui sono coinvolti diversi mediatori cellulari, tra cui il recettore di membrana CRTH2 e il neuropeptide VIP (vasoactive intestinal peptide). Mentre il binding di VIP con i suoi recettori canonici VPAC1 e VPAC2 è stato già parzialmente caratterizzato, VIP-CRTH2 viene indagato approfonditamente per la prima volta in questo progetto, con l'obiettivo di confermare e studiare l’interazione tra CRTH2 e VIP mediante saggi cellulari. A tal fine sono stati impiegati approcci sperimentali complementari: Saggi come Western blot e Cellular Thermal Shift Assay (CETSA), per la caratterizzazione dell’espressione e della termostabilizzazione del recettore in presenza del ligando, e il sistema PRESTO-TANGO, una piattaforma high-throughput per lo screening di potenziali ligandi di proteine di membrana. I risultati ottenuti hanno confermato l’interazione diretta tra VIP e CRTH2, suggerendo che VIP agisca come antagonista competitivo nel pathway di attivazione delle β-arrestine su CRTH2. Questi dati aprono la strada a studi futuri che includono la purificazione della proteina e l’impiego di tecniche biofisiche come la Surface Plasmon Resonance (SPR), con l’obiettivo finale di sviluppare potenziali antagonisti farmacologici in grado di bloccare tale interazione per contrastare la patologia.