Sviluppo di un modello in vitro di senescenza cellulare per la valutazione di composti a potenziale interesse terapeutico nell'ambito dell'osteoartrosi

L’osteoartrosi (Osteoarthritis, OA) è una patologia articolare cronico degenerativa, caratterizzata dalla progressiva degradazione della cartilagine articolare, associata ad alterazioni dell’osso subcondrale e infiammazione della membrana sinoviale. I principali sintomi includono dolore articolare, rigidità, ridotta mobilità e perdita progressiva della funzione articolare. L’eziopatogenesi dell’OA è multifattoriale e coinvolge numerosi fattori di rischio, tra cui invecchiamento, traumi, sovraccarico meccanico, obesità e predisposizione genetica. Una delle caratteristiche principali dell’OA è l’accumulo di cellule senescenti nei tessuti articolari, le quali, rilasciando mediatori pro-infiammatori e degradativi noti come Senescence-associated Secretory Phenotype (SASP), contribuiscono alla degradazione della cartilagine articolare, infiammazione cronica e dolore. Il presente lavoro di tesi ha l’obiettivo di sviluppare un modello in vitro di senescenza cellulare da utilizzare per lo screening di composti di interesse terapeutico. Il modello prevede l’utilizzo di una linea di condrociti bovini primari (PBC) su cui vengono testati diversi stimoli, con lo scopo di ricreare il meccanismo cellulare della senescenza in vitro. L’induzione del meccanismo cellulare è stata valutata attraverso un saggio che misura l’attività dell’enzima Senescence-associated beta-galactosidase (SA-β-Gal) e l’analisi di espressione genica tramite qRT-PCR di specifici markers molecolari, quali CDKN1A, CDKN2A, p53, IL-6, IL-8, MMP-13, ADAMTS-5 e SERPINE-1. Inoltre, sono state valutate tramite immunofluorescenza le proteine PCNA e Lamin B1, poiché consentono di valutare rispettivamente lo stato proliferativo della cellula e l’integrità nucleare, caratteristiche fondamentali della senescenza cellulare.