Caratterizzazione funzionale e molecolare di hiPSC-CMs con variante DSG2 p.Q558* e studio preliminare della risposta di hiPSC-EPIs a segnali paracrini.

La cardiomiopatia aritmogena è una patologia ereditaria causata principalmente da varianti patogene a livello dei geni codificanti le proteine dei dischi intercalari. Si caratterizza per la progressiva sostituzione del tessuto miocardico con tessuto fibro-adiposo, che, a livello sintomatico, si traduce in aritmie ventricolari, con conseguente aumentato rischio di morte cardiaca improvvisa. La maggior parte dei meccanismi molecolari alla base della malattia rimane ancora ignota, rendendo difficile lo sviluppo di terapie farmacologiche mirate. In questo lavoro di tesi sono stati generati cardiomiociti e cellule epicardiche a partire da hiPSCs (hiPSC-CMs e hiPSC-EPIs rispettivamente) presentanti la variante patogena p.Q558* nel gene DSG2 e dalla rispettiva linea isogenica, con lo scopo di disporre di modelli in vitro che possano essere potenzialmente impiegati nello screening di farmaci. La caratterizzazione di hiPSC-CMs attraverso l’analisi del battito, immunofluorescenza e western blot ha evidenziato alterazioni della contrazione spontanea e una riduzione dell’espressione della proteina desmosomale DSG2. Questa riduzione è stata osservata anche in hiPSC-EPIs. Per valutare il possibile ruolo delle cellule epicardiche nel processo di deposizione del tessuto fibro-adiposo, hiPSC-EPIs mutate e isogeniche sono state coltivate con il terreno condizionato di hiPSC-CMs isogenici e mutati, ipotizzando una possibile comunicazione paracrina tra le due tipologie cellulari. I livelli d’espressione dei marcatori epicardici e di transizione epitelio-mesenchimale (EMT) sono stati valutati tramite qPCR. L’assenza di variazioni nei livelli di espressione di quasi tutti i marcatori analizzati suggerisce che il processo di EMT non è stato avviato in nessuna delle condizioni testate.