Studi sul possibile coinvolgimento del fattore C3 del complemento nel ciclo blastogenetico dell’ascidia coloniale Botryllus schlosseri

Durante il mio tirocinio di laurea, come organismo modello ho utilizzato l’ascidia coloniale Botryllus schlosseri. Si tratta di una specie appartenente al subphylum dei Tunicati, considerati il sister group dei Vertebrati. Le colonie sono facili da allevare, vanno incontro a frequenti cambi generazionali, ed è semplice ottenere subcloni dello stesso organismo. B. schlosseri presenta sia riproduzione sessuata sia asessuata. Nel secondo caso si osserva l’alternarsi di tre generazioni che convivono contemporaneamente. A cicli settimanali gli adulti vengono riassorbiti progressivamente e sostituiti dalle loro gemme. L’intervallo di tempo tra un cambio generazionale e quello successivo è definito ciclo blastogenetico. In questo lavoro si è cercato di inattivare la molecola C3 del sistema del complemento in diversi modi, per indagare il ruolo di questa sul ciclo blastogenetico. In precedenza, si è dimostrato che C3 presenta un’espressione differenziale ed è espresso maggiormente durante il cambio generazionale ed è coinvolto nella fagocitosi. Alla luce di questi dati ci siamo chiesti se C3 avesse un ruolo nel ciclo blastogenetico. Al fine di valutare il coinvolgimento della molecola C3 nel ciclo blastogenetico si è andati ad analizzare l’effetto della compstatina, un farmaco che blocca l’attivazione di C3, e di un anticorpo commerciale per la proteina C3, il quale lega la proteina mascherandone la funzione. Ciascuna sostanza è stata iniettata in circolo ogni 24 ore e si è monitorato giornalmente, tramite l’utilizzo di uno stereomicroscopio, l’andamento del ciclo blastogenetico e le dimensioni degli individui. Al fine di valutare se ci fossero alterazioni morfogenetiche, si è proceduto ad un’analisi istologica. Sono stati anche iniettati un agonista e un antagonista per C3aR, al fine di valutare il loro effetto sull’espressione di C3. L’espressione di C3 è stata valutata mediante Real Time PCR.