Valutazione della produzione di biofilm da parte di Campylobacter jejuni e Campylobacter coli isolati da pollame domestico

Campylobacter jejuni e Campylobacter coli sono batteri Gram negativi e sono gli agenti eziologici di una delle più importanti zoonosi a livello mondiale: la campilobatteriosi. Questa è la malattia a trasmissione alimentare più frequente nell’Unione Europea con circa 240.000 casi confermati all’anno. L’EFSA stima che il 20-30% delle campilobatteriosi nell’uomo siano causate dal consumo di carne di pollo. Nelle specie avicole C. jejuni e C. coli sono solitamente considerati microrganismi commensali del tratto intestinale, tuttavia sono riportati anche casi di lesioni epatiche causate da un’invasione extra intestinale. Danni extra intestinali sono stati documentati anche nell’uomo e in altri animali. Alcuni batteri, tra cui C. jejuni e C. coli, hanno la capacità di produrre biofilm aumentando la loro sopravvivenza nell’ambiente e di conseguenza anche il rischio di infezione, sia nell’uomo che negli animali. La produzione di biofilm, infatti, permette ai batteri che lo producono una maggior resistenza ai lavaggi e alle disinfezioni delle superfici facilitando la loro persistenza negli allevamenti, soprattutto nei sistemi di abbeverata, e poi lungo la catena alimentare. In questo lavoro di tesi è stata valutata la capacità di produrre biofilm da parte di C. jejuni e C. coli isolati da pollame domestico e caratterizzati da un punto di vista molecolare mediante whole genome sequencing. La valutazione della produzione di biofilm è stata fatta in vitro ed è stato utilizzato un protocollo in microtitolo, precedentemente pubblicato ma modificato nel presente studio adattandolo alle condizioni necessarie per la crescita di C. jejuni e C. coli. Per poter valutare la capacità di formare biofilm dei ceppi si è innanzitutto fissato il biofilm con metanolo e colorato con cristalvioletto. Dopo una sospensione in acido acetico la quantificazione è stata fatta basandosi sull’assorbanza registrata a 570 nm per ogni campione (DoC) e rapportando ad un controllo negativo (DoNCT). Ogni campione è stato analizzato in sestuplicato. In base ai risultati ottenuti i campioni sono stati divisi in quattro classi differenti: “non produttori di biofilm” se DoC < DoNCT, “scarsi produttori di biofilm” se DoNCT < DoC < 2 x DoNCT, “moderati produttori di biofilm” se 2 x DoNCT < DoC < 4 x DoNCT e “forti produttori di biofilm” se 4 x DoNCT < DoC. Le classi di produzione di biofilm sono state successivamente correlate con la presenza/assenza di geni coinvolti nel processo di adesione ed invasione della cellula ospite, al fine di individuare possibili marker molecolari della produzione di biofilm.