Attività enzimatica di Botrytis cinerea su uva e rilevanza nella patogenicità

Botrytis cinerea è un fungo fitopatogeno necrotrofico con un ampio numero di ospiti in grado di in-fettare i vegetali e i loro prodotti sia prima che dopo la raccolta. Tra i vari ospiti, Vitis vinifera è di particolare rilevanza economica per la produzione di uva da tavola e da vino. L’Italia, e in generale l’Europa, è tra i primi esportatori di vino e uva da tavola. In campo, B. cinerea può causare perdite di prodotto che si aggirano sul 30%. Comprendere i meccanismi di attacco del patogeno e come es-so riesca a superare le difese costitutive e indotte della pianta ospite è essenziale per poter sviluppa-re nuove strategie di lotta. Nella prima parte della tesi è stata valutato il contributo alla virulenza di una endo-poligalatturonasi (PG1) e di una proteasi acidica (Acp1) secrete dal fungo durante l’infezione del frutto di mela. L’analisi è stata effettuata ricorrendo all’infezione con due ceppi difettivi (ΔPG1 e ΔAcp1) per i ri-spettivi geni. Entrambi i mutanti hanno mostrato una ridotta virulenza sul frutto di mela. Un’approfondita analisi della localizzazione della PG1 secreta da due diversi ceppi wild type di B. cinerea nell’acino d’uva ha messo in evidenza che l’enzima è localizzato nella zona di transizione che non presenta ancora il sintomo di malattia. Inaspettatamente, anche il mutante ΔAcp1 ha mo-strato una ridotta produzione della PG1. Nella seconda parte della tesi è stata indagata l’attività proteasica di B. cinerea coinvolta nella de-gradazione di una chitinase IV di uva, un enzima particolarmente abbondante nell’acino. La protea-si agisce sulla chitinasi rimuovendo il dominio di legame alla chitina (CBD). Mediante cromatogra-fia a scambio ionico sono state individuate alcune frazioni purificate la cui attività riproduce l’attività proteasica osservata nel filtrato colturale del fungo. Queste frazioni saranno oggetto di successive analisi per individuare l’enzima o gli enzimi responsabili della rimozione della CBD dal dominio catalitico della chitinasi.