Analisi di sequenziamento e valutazioni funzionali in vitro mediante tecniche di silencing per lo studio dei meccanismi molecolari alla base dell'iperplasia surrenalica macronodulare bilaterale

La PBMAH (primary bilateral macronodular adrenal hyperplasia) è una rara iperplasia delle ghiandole surrenaliche dal quadro clinico eterogeneo, tendenzialmente accompagnata da un’eccessiva secrezione di cortisolo associata alla sindrome di Cushing. Recentemente, nel laboratorio di Genetica Umana Molecolare, dalla combinazione di analisi NGS e SNP genotyping in una famiglia PBMAH, è stata identificata una variante non senso condivisa da tutti gli affetti della famiglia nel gene EFCAB2 (EF-hand calcium binding domain 2), le cui funzioni sono ad oggi poco note. In questo lavoro di tesi, il gene EFCAB2 è stato sequenziato in ulteriori dieci pazienti con PBMAH, alla ricerca di eventuali mutazioni causative nelle sue regioni codificanti, senza che siano tuttavia emerse alterazioni significative. Inoltre, per valutare il suo possibile coinvolgimento nella determinazione fenotipica della PBMAH, EFCAB2 è stato silenziato in maniera stabile utilizzando un approccio CRISPR-Cas9 nella linea cellulare H295R, un modello di carcinoma surrenalico. Negli esperimenti di silenziamento, tuttora in corso, è emersa una ridotta efficienza di editing genetico, forse conseguenza di rilevanti alterazioni cromosomiche (sia numeriche che strutturali), come evidenziato dall’analisi del cariotipo nelle H295R. Inoltre, è emerso un possibile collegamento fra la ridotta espressione di EFCAB2 e un’aumentata vitalità cellulare, dato che andrà ulteriormente confermato.