Il sistema endosomiale è essenziale per mantenere il corretto funzionamento e salute cellulare. Disfunzioni di questo sistema inducono accumulo e scorretta localizzazione di proteine e lipidi, recentemente associati a processi neurodegenerativi. Il flusso endosomiale è controllato da complessi multiproteici come il retromero, principale controllore dello smistamento subcellulare di proteine. Il retromero riconosce e lega le sue proteine-cargo tramite proteine-adattatore come SORL1, proteina con domini intra- ed extra-cellulari espressa principalmente nel sistema nervoso centrale. Data l’associazione di mutazioni del gene SORL1 con alcune forme di Alzheimer, questa funzione regolatrice retromero-dipendente del traffico proteico potrebbe essere correlata al fenotipo patalogico. La sequenza amminoacidica FANSHY nella coda citosolica C-terminale della proteina è di particolare interesse essendo il potenziale sito di legame al complesso retromerico. Lo scopo di questa tesi è quello predisporre protocolli sperimentali per valutare l’importanza della sequenza FANSHY nella regolazione dei livelli proteici dei patner di legame di SORL1. A tale scopo, le attività di ricerca sono incentrate sull’esecuzione di trasfezioni transienti con due versioni della proteina, una wild-type ed una mutata nella sequenza FANSHY. Sono stati analizzati i livelli proteici di SORL1, VPS26B, VPS35 e transgene (tramite FLAG) ed è stata valutata la loro localizzazione subcellulare tramite immunofluorescenza

Studio in vitro dell'importanza della sequenza FANSHY di SORL1 per l'integrità funzionale del complesso retromerico

CAMPANELLA, EMANUELA
2022/2023

Abstract

Il sistema endosomiale è essenziale per mantenere il corretto funzionamento e salute cellulare. Disfunzioni di questo sistema inducono accumulo e scorretta localizzazione di proteine e lipidi, recentemente associati a processi neurodegenerativi. Il flusso endosomiale è controllato da complessi multiproteici come il retromero, principale controllore dello smistamento subcellulare di proteine. Il retromero riconosce e lega le sue proteine-cargo tramite proteine-adattatore come SORL1, proteina con domini intra- ed extra-cellulari espressa principalmente nel sistema nervoso centrale. Data l’associazione di mutazioni del gene SORL1 con alcune forme di Alzheimer, questa funzione regolatrice retromero-dipendente del traffico proteico potrebbe essere correlata al fenotipo patalogico. La sequenza amminoacidica FANSHY nella coda citosolica C-terminale della proteina è di particolare interesse essendo il potenziale sito di legame al complesso retromerico. Lo scopo di questa tesi è quello predisporre protocolli sperimentali per valutare l’importanza della sequenza FANSHY nella regolazione dei livelli proteici dei patner di legame di SORL1. A tale scopo, le attività di ricerca sono incentrate sull’esecuzione di trasfezioni transienti con due versioni della proteina, una wild-type ed una mutata nella sequenza FANSHY. Sono stati analizzati i livelli proteici di SORL1, VPS26B, VPS35 e transgene (tramite FLAG) ed è stata valutata la loro localizzazione subcellulare tramite immunofluorescenza
2022
In vitro study of the importance of the SORL1 FANSHY sequence for the functional integrity of the retromer complex
sequenza FANSHY
proteina SORL1
retromero
Alzheimer
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