Studio in vitro dell'importanza della sequenza FANSHY di SORL1 per l'integrità funzionale del complesso retromerico

Il sistema endosomiale è essenziale per mantenere il corretto funzionamento e salute cellulare. Disfunzioni di questo sistema inducono accumulo e scorretta localizzazione di proteine e lipidi, recentemente associati a processi neurodegenerativi. Il flusso endosomiale è controllato da complessi multiproteici come il retromero, principale controllore dello smistamento subcellulare di proteine. Il retromero riconosce e lega le sue proteine-cargo tramite proteine-adattatore come SORL1, proteina con domini intra- ed extra-cellulari espressa principalmente nel sistema nervoso centrale. Data l’associazione di mutazioni del gene SORL1 con alcune forme di Alzheimer, questa funzione regolatrice retromero-dipendente del traffico proteico potrebbe essere correlata al fenotipo patalogico. La sequenza amminoacidica FANSHY nella coda citosolica C-terminale della proteina è di particolare interesse essendo il potenziale sito di legame al complesso retromerico. Lo scopo di questa tesi è quello predisporre protocolli sperimentali per valutare l’importanza della sequenza FANSHY nella regolazione dei livelli proteici dei patner di legame di SORL1. A tale scopo, le attività di ricerca sono incentrate sull’esecuzione di trasfezioni transienti con due versioni della proteina, una wild-type ed una mutata nella sequenza FANSHY. Sono stati analizzati i livelli proteici di SORL1, VPS26B, VPS35 e transgene (tramite FLAG) ed è stata valutata la loro localizzazione subcellulare tramite immunofluorescenza