Caratterizzazione farmacologica in vitro di nuovi agonisti peptidici del recettore NOP

In this thesis the pharmacology of the NOP receptor, target of the endogenous peptide nocicettin/orphanine FQ (N/OFQ) and member of the receptors coupled to proteins G. This peptide/receptor system controls numerous biological functions, interesting to develop potential analgesic drugs, anxiolytics, antitussives, antidepressants and antiparkinsonians. The purpose of the thesis was the identification and pharmacological characterization of new peptide ligands of the NOP receptor. A BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) approach, in which donor (luciferase) and acceptor (GFP) are fused to the NOP receptor and the G protein β subunit respectively, has been used to evaluate the biological effects of the insertion of non-amino acidsproteinogenic in the terminal C portion of N/OFQ. Some of these analogues show a higher potency than the natural peptide. In addition, the use of modifications in the terminal N portion of the peptide generated a new partial agonist of the NOP receptor. The measurement of intracellular levels of cyclic AMP allowed further evaluation of the properties of the most interesting compounds. In conclusion, as part of this thesis work new peptide ligands for the NOP receptor have been identified and characterized in vitro. The best compounds in this series will be evaluated in future in vivo experiments in normal animals and pathology models.

In questa tesi si è valutata la farmacologia del recettore NOP, target del peptide endogeno nocicettina/orfanina FQ (N/OFQ) e membro dei recettori accoppiati a proteine G. Questo sistema peptide/recettore controlla numerose funzioni biologiche, interessanti per sviluppare potenziali farmaci analgesici, ansiolitici, antitussivi, antidepressivi ed antiparkinsoniani. Lo scopo della tesi è stato l’identificazione e caratterizzazione farmacologica di nuovi ligandi peptidici del recettore NOP. Un approccio BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer), in cui donatore (luciferasi) ed accettore (GFP) sono fusi rispettivamente al recettore NOP e alla subunità β della proteina G, è stato impiegato per valutare gli effetti biologici dell’inserimento di amminoacidi non-proteinogenici nella porzione C terminale di N/OFQ. Alcuni di questi analoghi mostrano una potenza più elevata del peptide naturale. Inoltre, l’utilizzo di modifiche nella porzione N terminale del peptide ha generato un nuovo agonista parziale del recettore NOP. La misurazione dei livelli intracellulari di AMP ciclico ha consentito di valutare ulteriormente le proprietà dei composti più interessanti. In conclusione, nell’ambito di questo lavoro di tesi sono stati identificati e caratterizzati in vitro nuovi ligandi peptidici per il recettore NOP. I migliori composti di questa serie verranno valutati in futuri esperimenti in vivo in animali normali ed in modelli di patologia.