Sviluppo di marcatori intronici con sequenziamento Nanopore nei Lepidotteri con un approfondimento sul genere Erebia

In questo progetto sono stati sviluppati dei marcatori intronici per risolvere tre questioni biologiche: 1) risolvere le relazioni filogenetiche all‘interno della superfamiglia dei Papilionoidea, 2) indagare la filogenesi del genere Erebia e 3) testare la capacità dei marcatori intronici nell‘identificare due specie di Erebia (Erebia ligea ed Erebia euryale). Questa tesi si inserisce in un progetto più ampio che mira a sviluppare nuovi metodi molecolari per indagare la biodiversità. I marcatori intronici sono stati sviluppati con il metodo EPIC (Exon-primed intron-crossing) PCR, che prevede la costruzione di primer sulle sequenze esoniche fiancheggianti per l‘amplificazione degli introni. I loci intronici sono stati sequenziati con il metodo Nanopore, poiché più veloce, economico e permette il sequenziamento di frammenti molto lunghi. Le relazioni all‘interno della superfamiglia dei Papilionoidea non sono state risolte, perché i marcatori intronici sono risultati troppo variabili. Tuttavia, quest‘ultimi sono risultati efficaci per indagare la filogenesi delle specie congeneriche di Erebia e per identificare le due specie E. ligea ed E. euryale. Nonostante il metodo debba essere perfezionato e i loci intronici validati, i risultati ottenuti sono un primo passo per lo sviluppo di nuovi marcatori molecolari nei Lepidotteri, che permettano di risolvere relazioni ancora irrisolte.