Inattivazione del gene Kdm1a in una linea cellulare somatotropa attraverso l'utilizzo del sistema CRISPR/Cas9

Il Glucose-dependent Insulinotropic Polypeptide Receptor (GIPR) è un recettore transmembrana accoppiato alle proteine G. L’espressione ectopica di questo recettore è tipica di alcuni tumori endocrini, come i tumori ipofisari GH secernenti (GH-sec PAs) e la Primary Bilateral Macronodular Adrencortical Hyperplasia (PBMAH) dove svolge un ruolo prognostico e diagnostico. I GH-sec PAs che presentano GIPR espresso ectopicamente (GIPR+) sono sempre negativi per la mutazione GNAS1 e presentano più frequentemente una risposta paradossa del GH all’oral glucose tolerance test (OGTT) a sua volta associata ad un fenotipo clinico migliore. La causa dell’espressione ectopica di GIPR in questi tumori sembra essere correlata alla demetilasi istonica KDM1A che ricopre questo ruolo anche nei PBMAH. Infatti, recentemente è stato osservato che, in una quota significativa dei GH-sec PAs GIPR+ vi sia una correlazione tra la delezione monoallelica di KDM1A e l’espressione ectopica di GIPR. Questo elaborato ha come obiettivo l’approfondimento della relazione tra la delezione in KDM1A e l’espressione di GIPR nei GH-sec PAs. È stata effettuata la messa a punto della tecnica di analisi STRs per la ricerca della delezione in KDM1A in una piccola coorte di GH-sec PAs validata su campioni noti. Dall’output dell’analisi di 12 campioni, inaspettatamente nessuno è risultato deleto nel locus. Il lavoro principale di questo progetto di tesi coinvolge l’utilizzo della tecnica CRISPR/Cas9 per il Knockout Enrichment di Kdm1a nella linea cellulare GH3. Dopo una integrazione parziale della cassetta sono comunque stati ottenuti cloni che presentano una diminuzione significativa (p value= 0.0242) del 50% in proteina di Kdm1a. Risultato poi associato ad una diminuzione di Gipr (p value=0.095) del 60% nell’espressione del trascritto e del 48% (p value= 0.0209) in proteina di Gipr.