Produzione e caratterizzazione biofisica e funzionale delle proteine AspDH e Mpro per studi strutturali

La prima parte del progetto consiste nella cristallizzazione della proteina AspDH umana, candidata nell’identificarsi come catalizzatore di una reazione orfana del pathway delle chinurenine. Tramite la tecnica della diffusione di vapore isoterma, sono state testate numerose condizioni di cristallizzazione (variando sia parametri fisici di sistema come temperatura e cinetica, sia chimici come agenti precipitanti, additivi o sistemi tampone), con lo scopo di ottenere cristalli proteici da analizzare, eventualmente, attraverso la diffrazione a raggi X per ricavare preziose informazioni strutturali. La seconda parte, invece, propone lo studio di cinque composti candidati inibitori di Mpro, la principale proteasi del SARS-CoV-2. La maggior parte degli approcci farmaceutici sono basati sull’inibire tale proteina, che ha la funzione di tagliare il polipeptide post-traduzione per generare le proteine utili alla replicazione virale. Dopo aver prodotto e purificato Mpro, è stata studiata l’attività inibitoria dei cinque candidati tramite tecniche di fluorescenza (FRET-quenching). I risultati sono stati infine discussi attraverso un’analisi e caratterizzazione chimica (UV e MS soprattutto), per comprendere meglio le caratteristiche farmacologiche dei composti.