Caratterizzazione di cellule epicardiche e fibroblasti cardiaci differenziati da hiPSCs portatrici di una variante patogena nel gene DSP, associata alla cardiomiopatia aritmogena

La cardiomiopatia aritmogena è una malattia genetica rara, caratterizzata dalla morte dei cardiomiociti e sostituzione del miocardio con tessuto fibro-adiposo. Le alterazioni che ne derivano possono portare ad aritmie ventricolari che conducono a morte cardiaca improvvisa. La maggior parte delle varianti patogene associate alla malattia si trova in geni codificanti proteine dei dischi intercalari. In questo progetto di tesi, si è proceduto al differenziamento, e successivamente alla caratterizzazione, di cellule epicardiche e fibroblasti cardiaci, a partire da cellule staminali pluripotenti indotte ottenute da un paziente, che porta una variante non senso p.Q273* nel gene codificante per la proteina desmoplachina. Parallelamente, sono stati differenziati e analizzati i rispettivi controlli isogenici. L’efficacia del differenziamento è stata verificata tramite analisi di qPCR, che hanno confermato l’espressione dei marcatori epicardici WT1, TBX18 e TCF21 in hiPSCs-EPI e l’espressione dei marcatori dei fibroblasti VIM, COL1A1, COL3A1 e GATA4 in hiPSCs-CFs. Inoltre, è stata osservata l’espressione dei geni dei dischi intercalari DSP, JUP e CX43 in entrambi i tipi cellulari e l’espressione del gene desmosomale DSG2 in hiPSCs-EPI. Le analisi di immunofluorescenza hanno confermato la presenza dei markers di differenziamento e chiarito la localizzazione delle proteine dei dischi intercalari in hiPSCs-EPI e hiPSCs-CFs.