Valutazione dell'espressione e della funzionalità dei recettori oppioidi nelle cellule di Schwann

Schwann cells (SCs) appear to be involved in the mechanisms of migraine development as previous studies have demonstrated the expression of the receptor for Calcitonin Gene-Related Peptide (CGRP), the ligand responsible for the migraine attack, in SCs. Importantly, CGRP is already a target for some anti-migraine drugs that antagonise its activity. The CGRP receptor is a G protein-coupled receptor that signals by increasing levels of cyclic AMP (cAMP). Therefore, by stimulating G-protein-coupled receptors capable of decreasing the concentration of cAMP, an anti-migraine effect could be achieved through functional antagonism capable of blocking CGRP signalling. In this study we tried to determine whether the four members of the opioid receptor family are expressed and functional in SCs by applying RT-qPCR, Label-Free and confocal microscopy assays. Overall, we did not measure robust expression of the four opioid receptors at the mRNA level. In functional experiments, selective stimulation of opioid receptors generated variable responses, similar to CGRP. Finally, we started preliminary evaluations with fluorescence-labelled selective ligands in recombinant cells to prospectively assess the expression of opioid receptors in SCs at the membrane level.

Le cellule di Schwann (SC) sembrano essere coinvolte nei meccanismi di sviluppo dell'emicrania in quanto studi precedenti hanno dimostrato l'espressione del recettore per il Calcitonin Gene-Related Peptide (CGRP), ligando responsabile dell'attacco emicranico, nelle SC. È importante notare come il CGRP sia già un bersaglio per alcuni farmaci antiemicranici che antagonizzano la sua attività. Il recettore del CGRP è un recettore accoppiato a proteina G che segnala attraverso l'aumento dei livelli di AMP ciclico (cAMP). Pertanto, stimolando recettori accoppiati a proteina G in grado di diminuire la concentrazione di cAMP, si potrebbe ottenere un effetto antiemicranico attraverso un antagonismo funzionale in grado di bloccare il segnale del CGRP. In questo studio abbiamo cercato di determinare se i quattro membri della famiglia dei recettori oppioidi sono espressi e funzionali nelle SC applicando i saggi: RT-qPCR, Label-Free e microscopia confocale. Complessivamente, non abbiamo misurato un'espressione robusta dei quattro recettori oppioidi a livello di mRNA. Negli esperimenti funzionali, la stimolazione selettiva dei recettori oppioidi ha generato risposte variabili, analogamente al CGRP. Infine, abbiamo avviato valutazioni preliminari con i ligandi selettivi marcati con fluorescenza in cellule ricombinanti per valutare, in prospettiva, l'espressione dei recettori oppioidi nelle SC a livello di membrana.