Impact of Senolytic Treatment on Kidney Bioenergetic Function in RPTEC Cells as an Accompanying Model in Kidney Normothermic Machine Perfusion Research

Kidney transplantation remains the most effective treatment for end-stage renal disease; however, its application is constrained by the limited availability of suitable organ donors. One potential strategy to address this issue is to expand the criteria for donor eligibility, thereby establishing a category of extended criteria donors (ECD). Eurotransplant, for instance, has increased the maximum donor age to over 65 years. A significant concern with the use of "aged" organs is the age-dependent accumulation of senescent cells, which diminishes the regenerative capacity of transplanted kidneys and heightens the risk of delayed graft function (DGF). To reduce the likelihood of DGF associated with senescent cells, senotherapy may be employed during machine perfusion. This approach involves treating the organs with senolytic compounds to selectively eliminate senescent cells while simultaneously revitalizing the organ through machine perfusion. The research presented in this thesis focuses on elucidating the effects of two senolytic drug, Triacsin C and PRGL493, on the RPTEC/TERT1 cell model, with comparisons drawn to the effects observed in kidneys subjected to normothermic machine perfusion (NMP). High-resolution respirometry was conducted to assess alterations in mitochondrial respiration, revealing consistent changes across both samples, particularly in the fatty acid oxidation and NADH pathways. Nevertheless, further experimentation is required to increase the sample size and to better comprehend the full impact of senolytic therapy on mitochondrial function.

La trapiantologia renale rimane il trattamento più efficace per la malattia renale allo stadio terminale; tuttavia, la sua applicazione è limitata dalla scarsa disponibilità di donatori d'organo idonei. Una possibile strategia per affrontare questo problema consiste nell'espandere i criteri di idoneità per i donatori, creando così una categoria di donatori a criteri estesi (ECD). Eurotransplant, ad esempio, ha aumentato l'età massima dei donatori a oltre 65 anni. Una preoccupazione significativa legata all'uso di organi "invecchiati" è l'accumulo di cellule senescenti correlato all'età, che riduce la capacità rigenerativa dei reni trapiantati e aumenta il rischio di disfunzione precoce del graft (DGF). Per ridurre la probabilità di DGF associata alle cellule senescenti, potrebbe essere impiegata la senoterapia durante la perfusione meccanica. Questo approccio prevede il trattamento degli organi con composti senolitici per eliminare selettivamente le cellule senescenti, rivitalizzando contemporaneamente l'organo tramite la perfusione meccanica. La ricerca presentata in questa tesi si concentra sull'analisi degli effetti di due farmaci senolitici, Triacsin C e PRGL493, sul modello cellulare RPTEC/TERT1, con confronti sugli effetti osservati nei reni sottoposti a perfusione meccanica normotermica (NMP). È stata condotta una respirometria ad alta risoluzione per valutare le alterazioni nella respirazione mitocondriale, rivelando cambiamenti coerenti in entrambi i campioni, in particolare nei percorsi dell'ossidazione degli acidi grassi e del NADH. Tuttavia, sono necessari ulteriori esperimenti per aumentare la dimensione del campione e comprendere meglio l'impatto completo della terapia senolitica sulla funzione mitocondriale.