Modelli Embrionali di Zebrafish per la Valutazione di Sistemi di Rilascio Nanoparticellare

Le nanoparticelle lipidiche (LNP) sono utilizzate per la somministrazione di piccole molecole farmacologiche e per il delivery di acidi nucleici: l’incapsulamento protegge i cargo dalla degradazione e facilita il loro assorbimento a livello delle cellule bersaglio. Tra le principali applicazioni vi è la terapia genica, una tecnica che consente di trattare determinate patologie tramite sostituzione o modificazione mirata di sequenze geniche alterate. In questo contesto, gli embrioni di zebrafish (Danio rerio) rappresentano una piattaforma sperimentale vantaggiosa, poiché grazie alla loro trasparenza e al rapido sviluppo permettono il monitoraggio in vivo dei processi biologici. L’obiettivo del seguente studio è testare l’efficacia di veicolazione, in embrioni di zebrafish, di una nuova formulazione di LNP contenenti mRNA codificante per eGFP (enhanced green fluorescent protein), il quale è stato usato come reporter per monitorare l’espressione intracellulare del trascritto tramite microscopio a fluorescenza. A tal fine, LNP contenenti mRNA eGFP sono state microiniettate in vivo nel tuorlo di larve di zebrafish a 48 ore post-fecondazione (hpf). L’espressione di mRNA internalizzato dalle nanoparticelle d’interesse è stata confrontata con quella di mRNA eGFP naked e mRNA eGFP contenuto in LNP commerciali. Per valutare l’evoluzione dell’espressione del trascritto, le osservazioni sono state effettuate quotidianamente, tramite microscopio a fluorescenza, fino al quinto giorno post fecondazione. L’analisi del segnale di fluorescenza nell’embrione e il confronto tra i diversi gruppi sperimentali hanno permesso di testare l’efficacia della nuova formulazione di LNP come piattaforma per la somministrazione di mRNA in vivo: i risultati ottenuti forniscono indicazioni per l’ottimizzazione di sistemi di delivery basati su LNP, destinati ad applicazioni nell’ambito della terapia genica.