Isolamento di cellule di Schwann da tessuto muscolare murino mediante FACS

Schwann cells (SCs) are the main glial cells of the peripheral nervous system and play a fundamental role in the development, maintenance, and regeneration of peripheral nerves. In addition to providing structural and trophic support to axons, these cells regulate numerous biological processes through the release of molecular signals. One of their defining characteristics is phenotypic plasticity: following injury, they undergo a cellular reprogramming process that allows them to acquire a phenotype highly specialized in supporting nerve regeneration. The aim of this thesis is to optimize an isolation and purification protocol for SCs from murine muscle. Starting from the PLP-GFP mouse line, which expresses GFP in SCs, enzymatic and mechanical digestions were performed to yield a mixed cell population from which SCs were separated via fluorescence-activated cell sorting (FACS). The presence of GFP-positive cells and their viability were subsequently evaluated using fluorescence optical microscopy, providing an initial validation of the isolation protocol. The optimization of this procedure represents a preliminary step toward studying SCs in mouse models of Amyotrophic Lateral Sclerosis, a progressive neurodegenerative disease in which the involvement of SCs in the neuromuscular denervation and regeneration processes that characterize the early stages of the pathology makes their phenotypic and functional characterization particularly relevant.

Le cellule di Schwann (SCs) sono le principali cellule gliali del sistema nervoso periferico e svolgono un ruolo fondamentale nello sviluppo, nel mantenimento e nella rigenerazione dei nervi periferici. Queste cellule, oltre a fornire un supporto strutturale e trofico agli assoni, regolano numerosi processi biologici mediante il rilascio di segnali molecolari. Una delle loro caratteristiche distintive è la plasticità fenotipica: in seguito a danno vanno incontro a un processo di riprogrammazione cellulare che consente loro di acquisire un fenotipo altamente specializzato nel supportare il processo di rigenerazione nervosa. Lo scopo di questa tesi è ottimizzare un protocollo di isolamento e purificazione delle SCs da muscolo murino. A partire da linea murina plp-GFP, che esprime GFP nelle SCs, sono state eseguite disgregazioni enzimatiche e meccaniche per ottenere una popolazione cellulare mista da cui sono state separate le SCs tramite fluorescence-activated cell sorting (FACS). La presenza di cellule GFP-positive e la loro vitalità sono state successivamente valutate mediante microscopia ottica a fluorescenza, fornendo una prima validazione del protocollo di isolamento. L’ottimizzazione di questa procedura rappresenta un passaggio preliminare per lo studio di SCs in modelli murini di Sclerosi laterale amiotrofica, una malattia neurodegenerativa progressiva nel corso della quale il coinvolgimento delle SCs nei processi di denervazione e rigenerazione neuromuscolare che caratterizzano le prime fasi della patologia rende particolarmente rilevante la loro caratterizzazione fenotipica e funzionale.