Saggio ELISA per la quantificazione di citochine

The Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) is an effective biochemical assay for the detection and quantification of proteins and peptides. It is based on the use of antibodies that interact specifically with the target molecule and are conjugated with enzymes whose interaction with a substrate produces a chromophore. By measuring the absorbance of the chromophore, the target molecule can also be quantified. In this thesis the various types of ELISA and their principle of operation will be discussed. In particular, the ELISA protocol that has been applied in the laboratory to measure the concentration of different cytokines produced by Tumor Associated Macrophages (TAM) will be explored, describing the materials used, its steps in detail and the obtained results.

L’Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) è un efficace saggio biochimico per il rilevamento e la quantificazione di proteine e peptidi. Si basa sull’uso di anticorpi che interagiscono in modo specifico con la molecola target e sono coniugati con enzimi la cui interazione con un substrato produce un cromoforo. Misurando l’assorbanza del cromoforo è possibile quantificare anche la molecola target. In questa tesi verranno trattate le varie tipologie di ELISA ed il loro principio di funzionamento. Verrà approfondito in particolare il protocollo ELISA che è stato applicato in laboratorio per misurare la concentrazione di diverse citochine prodotte da Tumor Associated Macrophages (TAM), descrivendone i materiali utilizzati, i suoi passaggi nel dettaglio ed i risultati ottenuti.