Verifica delle performance diagnostiche di un kit ELISA per la ricerca dell’antigene del virus della diarrea virale bovina (BVDV) in cartilagine auricolare.

INTRODUCTION In the diagnosis of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection, ear notch tissue is an increasingly common matrix for ELISA antigen detection. However, the ear notch eluate prepared for the ELISA cannot generally be tested by PCR, requiring blood or tissue (spleen) sampling for confirmation. MATERIALS AND METHODS In this context, this experimental thesis aimed to evaluate the performance of a commercial Ag-ELISA kit for BVDV detection that allows the ELISA ear notch eluate to also be used for subsequent PCR confirmation. The study was conducted on a panel of 30 ear notch tissue samples collected during bovine necropsy. The expected infection status (8 positive and 22 negative) was previously determined by rRT-PCR performed on spleen samples as the reference method. The performance evaluation in terms of sensitivity, specificity, and reproducibility was carried out according to the IZSVe protocols. RESULTS The ELISA test showed good diagnostic performance, correctly identifying all negative samples and 7 out of 8 positive samples. The rRT-PCR test, run on the same ELISA eluate samples, correctly identified all negative samples and 6 out of 8 positive samples. Additionally, the inter-operator reproducibility of the ELISA assay showed complete concordance (K=1). CONCLUSION Despite the limited sample size, the study demonstrated the potential of the evaluated test as a diagnostic tool for BVDV detection. The use of the same eluate sample for ELISA and PCR assays could also reduce analytical processing times and sampling costs, avoiding the need of additional invasive sampling. Further investigations based on a larger sample size will be necessary to determine diagnostic sensitivity and specificity with high statistical confidence.

INTRODUZIONE Nella diagnosi di infezione da virus della diarrea virale bovina (BVDV), la cartilagine auricolare è una matrice sempre più utilizzata per la ricerca dell’antigene tramite saggio ELISA, ma il campione eluito per la prova ELISA non può essere utilizzato generalmente per eseguire il test di conferma in PCR, rendendo necessario il prelievo di un campione di sangue o d’organo (milza) per la conferma. MATERIALI E METODI In questo contesto, il presente lavoro di tesi sperimentale si è proposto di valutare le performance di un kit Ag-ELISA in commercio per la ricerca del BVDV che consente di sottoporre l’eluito di cartilagine auricolare preparato per l’ELISA anche alla successiva analisi di conferma in PCR. Lo studio è stato condotto su un pannello di 30 campioni di cartilagine auricolare raccolti in sede necroscopica. L’esito atteso dei campioni (8 positivi e 22 negativi) è stato precedentemente definito tramite rRT-PCR su milza, impiegata come metodica di riferimento. Le verifica delle performance in termini di sensibilità, specificità e riproducibilità della prova è stata eseguita secondo le modalità in uso presso l’IZSVe. È stata inoltre valutata la riproducibilità inter-operatore del saggio ELISA mediante l'esecuzione in doppio del test da parte di due operatori differenti in giornate distinte. RISULTATI Il test ELISA ha evidenziato buone prestazioni diagnostiche, individuando correttamente tutti i campioni negativi e 7 positivi su 8. La prova in rRT-PCR, effettuata utilizzando il medesimo eluito di cartilagine della prova ELISA ha individuato correttamente tutti i campioni negativi e 6 positivi su 8. La valutazione della riproducibilità inter-operatore ha evidenziato un grado di concordanza perfetto (k=1). CONCLUSIONI Nonostante la ridotta numerosità campionaria, lo studio ha dimostrato le potenzialità del test oggetto di studio come alternativa diagnostica per la ricerca di BVDV; la possibilità di impiego del medesimo eluito per più determinazioni consente anche di ridurre i tempi analitici e costi di campionamento, evitando ulteriori prelievi invasivi. L’ampliamento del campione permetterà di stimare le prestazioni sensibilità e specificità diagnostica con adeguati livelli di confidenza.