INDAGINI ANATOMO-ISTOPATOLOGICHE, IMMUNOISTOCHIMICHE E ULTRASTRUTTURALI SU UNA NUOVA MALATTIA DA ACCUMULO LISOSOMIALE DEL CANE AZAWAKH

Globoid cell Leukodystrophy or Krabbe disease (KD) is an autosomic recessive neurodegenerative disorder derived from the lysosomal enzymatic deficiency of Galattocerebrosidasis. This enzyme is responsible for the catabolism of galactocerebrosides into ceramide and galactose. The altered functionality of the Galactocerebrosidase causes accumulation of its substrates, primarily Galactosylceramide (GalCer) and, to a lesser extent, Psychosine (PSY). The accumulation of GalCer recruits the macrophage immune component which plays a pivotal role in the development of globoid cells; PSY is a molecule with cytotoxic properties at the nervous level and its accumulation is responsible for the degenerative and inflammatory pathogenesis of KD. The case study of the thesis was selected because of compatible clinical symptoms and post-mortem findings consistent with KD. Following the necropsy, the nerve tissue samples were fixed in formalin and subsequently trimmed; and embedded into paraffin. Paraffinized blocks were cut with the microtome to obtain tissue sections, which were placed on TOMO adhesion slides. In addition to routine Hematoxylin and Eosin stain, two other histopathological stains - Periodic acid - Schiff and the Luxol-Fast blue technique stain - were selected for the evaluation of the samples. For immunohistochemical analysis, two different antibodies, GFAP and IBA-1, were then selected. Finally, representative sections of the Central Nervous System (SNC) were also sampled for transmission electron microscopy studies. Neuropathological evaluations have shown morphological features compatible with the diagnosis of Globoid cell Leukodystrophy, such as strong signs of demyelination, the abundant of globoid cells in the perivascular regions, and strong astrogliosis. However, it is not possible to confirm the diagnosis as not all studies have been conclusive. To reach a certain diagnosis it is possible to consider further studies, especially at the genetic level, such as the genotyping of the GALC gene.

La Leucodistrofia a cellule globoidi o Malattia di Krabbe (KD) è una malattia autosomica recessiva neurodegenerativa, risultato dalla carenza enzimatica lisosomiale della galattocerebrosidasi. Questo enzima è responsabile del catabolismo di galattocerebrosidi in ceramide e galattosio. L’alterata funzionalità della galattocerebrosidasi determina accumulo dei suoi substrati, primariamente Galattosilceramide (GalCer) e in minor modo Psicosina (PSY). L’accumulo di GalCer richiama la componente immunitaria macrofagica che ha un ruolo cardine nello sviluppo delle cellule globoidi; la PSY è una molecola dalle proprietà citotossiche a livello nervoso e il suo accumulo sarà responsabile della patogenesi degenerativa e infiammatoria della KD. È stato selezionato un caso studio oggetto della tesi, con sintomatologia clinica compatibile e riscontri post mortem concordi con KD. In seguito a necroscopia, i campioni di tessuto nervoso sono stati immersi in formalina per poi essere trimmati e inclusi in paraffina. Una volta ottenuti i blocchetti paraffinati sono stati tagliati con il microtomo per ricavarne sezioni di tessuto da posizionare su vetrini TOMO. Sono state selezionate diverse tecniche per la valutazione dei campioni, due colorazioni istopatologiche tramite l’uso di Acido periodico – Schiff e l’uso di Luxol- Fast blue; per la valutazione immunoistochimica sono stati selezionati due diversi anticorpi, GFAP e IBA-1. Le fotografie ottenute tramite il microscopio elettronico a trasmissione sono state eseguite in seguito all’esame necroscopico. Le valutazioni neuropatologiche hanno dimostrato delle caratteristiche compatibili con la diagnosi di leucodistrofia a cellule globoidi, come forti segni di dismielinizzazione, la presenza stessa delle cellule globoidi nelle regioni perivascolari e forte astrogliosi. Tuttavia, non è possibile confermare la diagnosi in quanto non tutti gli studi si sono rivelati conclusivi. Per il raggiungimento di una diagnosi certa è possibile considerare ulteriori studi specialmente a livello genetico, come la genotipizzazione del gene GALC.