Messa a punto di un saggio basato sull'impiego del citocromo C per valutare la riduzione della carica negativa sulla superficie di Mycobacterium smegmatis indotta dall'espressione della proteina LysX2

Lysx2 è una proteina MprF-like. Le proteine di questa famiglia modificano il fosfolipide di membrana fosfatidilglicerolo, carico negativamente, aggiungendo degli amminoacidi come la lisina, rendendo quindi la superficie del batterio meno negativa. Questo conferisce resistenza al pH acido o alle proteine CAMPs, componenti del sistema immunitario innato, in quanto queste molecole e i protoni sono carichi positivamente. La proteina Lysx2, al contrario di altre proteine Mprf-like, presenta un dominio catalitico extracellulare. Inoltre essa è stata riscontrata solo nei micobatteri patogeni e questo indicherebbe un’importanza nella patogenesi e nella virulenza. In questo lavoro siamo andati a verificare se la proteina LysX2 di Mycobacterium tuberculosis altera la carica superficiale del micobatterio rendendola meno negativa in presenza di pH acido, modifica funzionale per aumentarne la resistenza a questo tipo di stress incontrato durante l’infezione dell’ospite. Per fare ciò, è stato messo a punto un saggio per stimare la carica superficiale dei micobatteri utilizzando il Citocormo C, che avendo una carica netta positiva tende a legarsi alla superficie dei batteri più questa presenta una carica negative. Il saggio ha permesso di stimare la carica superficiale di due diversi ceppi del micobatterio non patogeno M. smegmatis, uno esprimente LysX2 e uno che ne è privo, cresciuti in condizioni di pH fisiologico e di pH acido, riuscendo così ad apprezzare variazioni dovute all’azione della proteina in diverse condizioni ambientali.