Mycobacterium tuberculosis è uno dei patogeni più antichi e temibili nella storia dell’umanità. La sua particolare resilienza si deve ad una serie di caratteristiche, tra cui spicca la rapida modulazione della risposta trascrizionale ai vari stress a cui è sottoposto nel corso dell’infezione. Il grande numero di fattori σ, codificati dal genoma del patogeno, ha sicuramente un ruolo fondamentale in questo processo. Tra questi, il fattore σC è fra i meno conosciuti. Nello specifico, la sua regolazione è ancora piuttosto ignota, infatti non sembra associato ad alcun fattore anti-σ specifico. La proteina tubercolare Rv0093c rappresenta però un buon candidato, sulla base di studi di omologia con altre specie micobatteriche. In questo lavoro di tesi è stato sfruttato il saggio di complementazione proteica M-PFC per testare l’interazione tra σC ed Rv0093c. La tecnica permette di sfruttare un enzima reporter modulare, mDHFR, i cui domini sono stati associati alle proteine in esame. Nel micobatterio modello M. smegmatis, l’interazione tra le due proteine ha permesso l’avvicinamento dei domini di mDHFR e dunque la sua ricostituzione funzionale, garantendo al batterio la resistenza all’antibiotico Trimetoprim. La conferma di questa interazione suggerisce dunque che la proteina finora sconosciuta Rv0093c possa effettivamente essere il fattore anti-σC specifico.

Analisi dell'interazione tra le proteine SigC e Rv0093c di Mycobacterium tuberculosis mediante saggio di complementazione proteica

POZZA, ELISABETTA
2021/2022

Abstract

Mycobacterium tuberculosis è uno dei patogeni più antichi e temibili nella storia dell’umanità. La sua particolare resilienza si deve ad una serie di caratteristiche, tra cui spicca la rapida modulazione della risposta trascrizionale ai vari stress a cui è sottoposto nel corso dell’infezione. Il grande numero di fattori σ, codificati dal genoma del patogeno, ha sicuramente un ruolo fondamentale in questo processo. Tra questi, il fattore σC è fra i meno conosciuti. Nello specifico, la sua regolazione è ancora piuttosto ignota, infatti non sembra associato ad alcun fattore anti-σ specifico. La proteina tubercolare Rv0093c rappresenta però un buon candidato, sulla base di studi di omologia con altre specie micobatteriche. In questo lavoro di tesi è stato sfruttato il saggio di complementazione proteica M-PFC per testare l’interazione tra σC ed Rv0093c. La tecnica permette di sfruttare un enzima reporter modulare, mDHFR, i cui domini sono stati associati alle proteine in esame. Nel micobatterio modello M. smegmatis, l’interazione tra le due proteine ha permesso l’avvicinamento dei domini di mDHFR e dunque la sua ricostituzione funzionale, garantendo al batterio la resistenza all’antibiotico Trimetoprim. La conferma di questa interazione suggerisce dunque che la proteina finora sconosciuta Rv0093c possa effettivamente essere il fattore anti-σC specifico.
2021
Analysis of the interaction between the proteins SigC and Rv0093c in Mycobacterium tuberculosis by protein complementation assay
SigC
Rv0093c
MTB
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Utilizza questo identificativo per citare o creare un link a questo documento: https://hdl.handle.net/20.500.12608/32794