Studio della fosforilazione di ATAD3B e le possibili implicazioni nella sua capacità di oligomerizzare

The ATAD3A protein family is composed of ATAD3A and ATAD3B, with the latter being present in primates and humans as a consequence of a gene duplication from ATAD3A. Despite the high sequence similarity, ATAD3B presents a 62 amino acids extension at the C-terminal, which is consequence of a point mutation in the stop codon. From the functional point of view, while ATAD3A is essential for mitochondrial function, the role of ATAD3B is unclear. Previous studies have proposed a dominant negative effect of ATAD3B on ATAD3A, due a possible interaction between both proteins. With this work, we attempt to validate this hypothesis by investigating whether ATAD3A and ATAD3B can homo- or hetero-oligomerize, and if this might be mediated by the phosphorylation events predicted by bioinformatic analysis, although never confirmed in previous experiments. The results obtained through cross-linking seem to indicate that ATAD3A and ATAD3B do not oligomerize, but rather ATAD3B homo-oligomerizes. Moreover, through Phos-tag analysis, ATAD3B does not seem to phosphorylate, suggesting that the phosphorylation does not regulate the oligomerization.

La famiglia delle proteine mitocondriali ATAD3 è costituita da ATAD3A e ATAD3B, quest’ultima comparsa nei primati come conseguenza di una duplicazione di ATAD3A. La sequenza è altamente conservata ad eccezione di un’estensione di 62 amminoacidi al C-terminale, conseguenza di una mutazione puntiforme nel codone di stop di ATAD3B. ATAD3A è importante per il corretto funzionamento mitocondriale, mentre la funzione di ATAD3B rimane ancora poco chiara. In questo lavoro è stata validata l’ipotesi che ATAD3B possa agire come un dominante negativo di ATAD3A legandosi ad esso, investigando se ATAD3A e ATAD3B fossero in grado di omo- o etero-oligomerizzare. In più, si voleva investigare, se questa loro capacità potesse essere regolata da eventi di fosforilazione, predetti da analisi bioinformatiche, ma mai confermate in letteratura. Gli esperimenti di cross-linking eseguiti sembrerebbero mostrare che ATAD3A e ATAD3B non etero-oligomerizzano, ma che ATAD3B abbia una maggiore capacità di omo-oligomerizzare. Inoltre, lo studio degli eventi di fosforilazione tramite la tecnica del Phos-tag, sembrerebbe escludere che, nelle nostre condizioni sperimentali, ATAD3B sia fosforilata, portando quindi a pensare che la sua maggiore capacità di oligomerizzazione non sia dovuta alla fosforilazione.