Indagini preliminari sull'espressione di p21 nel corso del ciclo blastogenetico dell'ascidia coloniale Botryllus schlosseri.

Botryllus schlosseri is a colonial ascidian (phylum Chordata, subphylum Tunicata) common in the Venice lagoon, used as a model animal in immunobiology, regeneration and asexual reproduction studies. The zoids, the adult individuals of the colony, are grouped in star systems and on them grow palleal buds bearing buds. In a colony, therefore, three blastogenic generations are always present. Weekly, at a temperature of 19 ° C, there is a change of generation, known as take-over, during which the zoids stop filtering, close their siphons and are reabsorbed, giving way to their buds, which will become zoids. adults when they begin to filter. The blastogenic cycle is defined as the time interval between two successive take-overs (TO) and the mid cycle the phases of the cycle more than a day away from the TO. Preliminary data indicate the onset of cellular senescence phenomena during the TO. During my thesis work, I characterized for the first time, for the colonial sea squirt B. schlosseri, an orthologous sequence to the mammalian p21 sequence, involved in cellular senescence and encoding a cyclin-dependent kinase inhibitor. Starting from a transcript sequence of Botrylloides leachii, another colonial sea squirt, used as a query sequence, I identified two highly similar sequences of B. schlosseri in the ANISEED and Octopus tunicate databases. The design of specific primers allowed me to obtain, by PCR, an amplicon, the sequencing of which confirmed the sequences found in the databases. The obtained sequence was named Bs-p21 and on it I designed the primers to conduct the gene expression studies by qRT-PCR. The transcription of Bs-p21 was analyzed during the blastogenic colonial cycle. The results obtained indicate a higher transcription of Bs-p21 at the mid cycle. The latter have been interpreted on the basis of what is already known about cyclic cellular senescence in B. schlosseri and senescence in other vertebrates, considering the evolutionary proximity of botrillo to this group.

Botryllus schlosseri è un’ascidia coloniale (phylum Chordata, subphylum Tunicata) comune nella laguna di Venezia, utilizzata come animale modello in studi di immunobiologia, rigenerazione e riproduzione asessuata. Gli zoidi, gli individui adulti della colonia, sono raggruppati in sistemi stellati e su di essi si accrescono gemme palleali recanti gemmule. In una colonia, pertanto, sono sempre presenti tre generazioni blastogenetiche. Settimanalmente, alla temperatura di 19°C, si assiste ad un cambio di generazione, noto come take-over, durante il quale gli zoidi cessano di filtrare, chiudono i loro sifoni e vengono riassorbiti, lasciando il posto alle loro gemme, che diventeranno zoidi adulti nel momento in cui cominceranno a filtrare. Si definisce ciclo blastogenetico l’intervallo di tempo tra due take-over (TO) successivi e mid cycle le fasi del ciclo distanti più di un giorno dal TO. Dati preliminari indicano l’instaurarsi di fenomeni di senescenza cellulare nel corso del TO. Nel corso del mio lavoro di tesi ho caratterizzato per la prima volta, per l’ascidia coloniale B. schlosseri, una sequenza ortologa alla sequenza p21 di mammifero, coinvolta nella senescenza cellulare e che codifica per un inibitore della chinasi dipendente dalla ciclina. A partire da una sequenza di trascritto di Botrylloides leachii, un’altra ascidia coloniale, usata come sequenza query, ho identificato, nei database dei tunicati ANISEED e Octopus, due sequenze di B. schlosseri ad elevata similarità. Il disegno di primer specifici mi ha permesso di ottenere, tramite PCR, un amplicone, il sequenziamento del quale ha confermato le sequenze trovate nei database. La sequenza ottenuta è stata denominata Bs- p21 e su di essa ho disegnato i primer per condurre gli studi di espressione genica tramite qRT-PCR. La trascrizione di Bs-p21 è stata analizzata nel corso del ciclo coloniale blastogenetico. I risultati ottenuti indicano una maggior trascrizione di Bs-p21 al mid cycle. Quest’ultimi, sono stati interpretati sulla base di quanto già noto sulla senescenza cellulare ciclica in B. schlosseri e sulla senescenza in altri Vertebrati, considerando la vicinanza evolutiva di botrillo a questo gruppo.