Valutazione dell'infettività di diversi agenti oncolitici basati sul virus dell'herpes simplex di tipo 1

This thesis is part of a project focused on the development of oncolitic agents based on the herpes simplex virus type 1 for the treatment of solid tumors. In order to select the best performing recombinant HSV-1s to test in vivo, viruses are initially assayed in vitro for their lytic activity and specificity towards different types of tumors. In this context, it is crucial to adopt standardized viral preparations, especially in terms of infectivity, i.e. the ability of the virus to enter into target cells and make the genome available for replication and transcription. In this thesis the infectivity of different types of wild-type and recombinant HSV-1s was evaluated, through an immunofluorescence essay run on breast cancer triple negative cells (MDA-MB-231) infected with comparable quantities of viral particles. Furthermore, viruses were tested for their replicative ability by adopting the same target cells and titrated by plaque formation on monkey kidney Vero cells. The obtained results allowed us to standardize the produced viral stocks and to precisely evaluate the recombinant HSV-1s replication ability in tumor cells.

Questo progetto di tesi si è inserito all’interno di un progetto più ampio che verte sullo sviluppo di agenti oncolitici basati sul virus dell’herpes simplex di tipo 1 per il trattamento dei tumori solidi. Nel momento in cui i virus oncolitici vengono valutati in vitro per la loro attività oncolitica e per la loro selettività nei confronti di particolari tipi di tumori, al fine di selezionare quale testare in vivo, è fondamentale partire da preparazioni virali standardizzate soprattutto in termini di infettività, ovvero la capacità del virus di entrare nelle cellule bersaglio e liberare il genoma che può essere replicato e trascritto. In questa tesi è stata valutata l’infettività di diverse tipologie HSV-1 wild type e ricombinante, mediante saggio di immunofluorescenza eseguito su cellule di tumore mammario triplo negativo (MDA-MB-231) infettate con quantità paragonabili di particelle virali. Inoltre, i virus sono stati valutati per la loro capacità replicativa sempre utilizzando le stesse cellule bersaglio e un saggio di titolazione mediante formazione di placche su cellule di rene di scimmia Vero. I risultati ottenuti ci hanno permesso di standardizzare gli stock virali prodotti e di valutarne con precisione la capacità replicativa in cellule tumorali.