La Malattia di Parkinson (MP) è la seconda malattia neurodegenerativa più comune. Nelle forme familiari sono state caratterizzate varianti del gene LRRK2. Nonostante i meccanismi alla base della malattia non siano ancora chiari, la patogenicità di tali varianti gain of function è ben nota. È necessario, perciò, chiarire il ruolo fisiologico della proteina LRRK2 e capire come questa sia coinvolta nella patogenesi della malattia. Fondamentale per caratterizzare i pathways che la riguardano è studiare le proteine con cui interagisce. Analisi preliminari di proteomica effettuate nel laboratorio dove ho svolto il tirocinio hanno evidenziato TRIM32, una E3-ubiquitin ligasi, come possibile interattore di LRRK2; quindi, la sua attività potrebbe contribuire alla patogenesi nella MP. L’obiettivo di questo studio è quello di validare l’interazione tra LRRK2 e TRIM32. Per fare ciò, sono state ottenute linee cellulari esprimenti LRRK2, con tag Flag, wild-type e mutata. Attraverso l’immunoprecipitazione con resina anti-Flag e l’analisi di Western Blot è stata validata l’interazione tra le due proteine. Inoltre, in seguito alla quantificazione dei risultati ottenuti, l’entità dell’interazione tra TRIM32 e LRRK2 mutata si è rivelata differente rispetto alla condizione fisiologica.

Validazione dell'interazione tra le proteine LRRK2 e TRIM32 e implicazione nella malattia di Parkinson

PANAZZOLO, ALESSIA
2021/2022

Abstract

La Malattia di Parkinson (MP) è la seconda malattia neurodegenerativa più comune. Nelle forme familiari sono state caratterizzate varianti del gene LRRK2. Nonostante i meccanismi alla base della malattia non siano ancora chiari, la patogenicità di tali varianti gain of function è ben nota. È necessario, perciò, chiarire il ruolo fisiologico della proteina LRRK2 e capire come questa sia coinvolta nella patogenesi della malattia. Fondamentale per caratterizzare i pathways che la riguardano è studiare le proteine con cui interagisce. Analisi preliminari di proteomica effettuate nel laboratorio dove ho svolto il tirocinio hanno evidenziato TRIM32, una E3-ubiquitin ligasi, come possibile interattore di LRRK2; quindi, la sua attività potrebbe contribuire alla patogenesi nella MP. L’obiettivo di questo studio è quello di validare l’interazione tra LRRK2 e TRIM32. Per fare ciò, sono state ottenute linee cellulari esprimenti LRRK2, con tag Flag, wild-type e mutata. Attraverso l’immunoprecipitazione con resina anti-Flag e l’analisi di Western Blot è stata validata l’interazione tra le due proteine. Inoltre, in seguito alla quantificazione dei risultati ottenuti, l’entità dell’interazione tra TRIM32 e LRRK2 mutata si è rivelata differente rispetto alla condizione fisiologica.
2021
Validation of LRRK2-TRIM32 interaction and implication in Parkinson's Disease
Parkinson
LRRK2
TRIM32
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Utilizza questo identificativo per citare o creare un link a questo documento: https://hdl.handle.net/20.500.12608/34822