TIAR, un’importante componente proteica degli stress granules, nell’ascidia coloniale Botryllus schlosseri

Botryllus schlosseri è un’ascidia coloniale appartenente al subphylum dei tunicati. Il ciclo vitale di questa specie, che prevede periodici cambi di generazione, fa di questo organismo un ottimo modello di studio sulla rigenerazione e la risposta allo stress. La proteina TIAR è una proteina legante l’mRNA, ampiamente studiata nei Vertebrati, che partecipa alla formazione degli stress granules, agglomerati di proteine, mRNA e fattori di inizio della traduzione all’interno dei quali viene momentaneamente bloccata la traduzione di mRNA in proteine anti-stress durante una condizione di stress acuto. Per il mio lavoro di tesi ho utilizzato la proteina TIAR come marcatore per lo studio della possibile dinamica di formazione degli stress granules durante il ciclo coloniale blastogenetico di B. schlosseri e un loro coinvolgimento nella regolazione della risposta immunitaria di questo cordato invertebrato. Utilizzando un anticorpo anti-TIAR specifico, validato tramite Western Blot, ho condotto esperimenti di immunocitochimica e immunoistochimica in fasi diverse del ciclo blastogenetico di B. schlosseri, per individuare in quali tipi di emociti e in quali distretti corporei dell’animale venga espressa la proteina. La trascrizione del gene per TIAR è stata analizzata, durante il ciclo blastogenetico di botrillo, tramite ibridazione in situ su preparati di emolinfa, rivelando una buona correlazione con quanto ottenuto tramite gli esperimenti con l’anticorpo anti-TIAR. Si è fatto anche ricorso alla microscopia elettronica per valutare la localizzazione della proteina TIAR a livello subcellulare, in particolar modo negli immunociti, mediante l’utilizzo dell’anticorpo anti-TIAR e di un anticorpo secondario coniugato con oro colloidale. L’anticorpo contro la proteina TIAR è stato inoltre microiniettato nel sistema circolatorio di B. schlosseri per valutarne gli effetti nel ciclo blastogenetico coloniale. In alcuni casi le colonie trattate sono state incluse e usate per studi istochimici, per valutare eventuali danni morfologici ai tessuti degli zoidi. Sono stati infine eseguiti dei saggi di degranulazione e di fagocitosi dopo 24 h dalla microiniezione dell’anticorpo in colonie a metà del loro ciclo blastogenetico, per valutare l’importanza di TIAR nella regolazione di questi due processi che sono alla base della risposta immunitaria innata di botrillo.