Tipizzazione HLA in Next Generation Sequencing per la valutazione della compatibilità donatore-ricevente nel trapianto allogenico di cellule staminali emopoietiche

Il sistema HLA (Human Leukocyte Antigens) è un complesso di antigeni del sistema immunitario umano che gioca un ruolo fondamentale nei trapianti allogenici di cellule staminali emopoietiche (CSE); infatti, questi sono possibili solamente fra due individui che siano HLA-identici, cioè che presentino lo stesso aplotipo dei geni HLA. Il compito dei laboratori di immunogenetica è identificare e confermare la compatibilità fra donatore-ricevente con tecniche analitiche ad alta risoluzione, limitando così l’insorgenza di eventi avversi post-trapianto; il laboratorio di HLA dell’Ospedale dell’Angelo di Mestre ha introdotto l’NGS con tecnologia Illumina con questo scopo. L’NGS è una tecnica di sequenziamento che permette di processare un elevato numero di campioni in un’unica seduta offrendo risultati con risoluzione allelica, cioè non limitata ai soli esoni informativi. Lo scopo di questo elaborato è dimostrare come la sua introduzione migliori il flusso di lavoro nel laboratorio, riducendo tempi di refertazione e costi, incrementando simultaneamente la qualità del risultato necessario alla cura del paziente. Per raggiungere tale obbiettivo, sarà illustrato il protocollo “Tipizzazione HLA in NGS” dell’AULSS3 Serenissima, dimostrando come il sequenziamento di seconda generazione è stato integrato nella routine laboratoristica, potenziandone le performance. Successivamente ad una breve descrizione dello strumento Illumina MiSeqDx, verranno descritti i software e le metriche di qualità adottate, oltre che agli algoritmi, che consentono il raggiungimento della tipizzazione HLA sicura, inequivocabile e senza ambiguità. A dimostrazione di ciò, verranno illustrati due esempi di studio famigliare per la compatibilità HLA per il trapianto di CSE, completi di test di conferma donatore-ricevente in NGS. In conclusione, sarà evidente l’enorme potenzialità dell’NGS applicata alla valutazione della compatibilità donatore-ricevente nel trapianto allogenico di CSE.