Analisi Genetica di Adenomi Surrenalici Aldosterone Secernenti: Applicazione della Tecnologia Next Generation Sequencing

Introduzione: L’iperaldosteronismo primario (PA), anche conosciuto come sindrome di Conn, è la forma più comune di ipertensione secondaria endocrina. Clinicamente, PA si manifesta con ipertensione arteriosa, elevati livelli di aldosterone plasmatico, ipopotassiemia e soppressione della renina plasmatica. Una delle principali cause di PA è la presenza di adenomi surrenalici aldosterone secernenti (APA). Recentemente, le nuove tecniche di sequenziamento del DNA, definite Next Generation Sequencing (NGS), hanno consentito di identificare mutazioni somatiche responsabili dell’eccessiva produzione di aldosterone e mutazioni germinali che caratterizzano alcune forme rare familiari di PA. Lo scopo di questo studio è stato validare uno specifico pannello genico di sequenziamento con tecnologia NGS per lo studio di varianti genetiche nei pazienti affetti da APA. Materiali e metodi: Il DNA è stato estratto e purificato da biopsie surrenaliche ottenute da 63 pazienti sottoposti a surrenectomia laparoscopica. Le librerie per il sequenziamento NGS sono state preparate mediante frammentazione del DNA, ligazione degli adattatori, arricchimento e cattura dei frammenti degli acidi nucleici mediante sonde specifiche per i geni selezionati. Il pannello genico è costituito da 12 geni e comprende la parte esonica e il border intronico-esonico di 10 basi (KCNJ5, ATP1A1, ATP2B3, CACNA1D, CACNA1H, CLCN2, CTNNB1, ARMC5, GNAQ, GNA11, PRKACA, APC). Il sequenziamento NGS è stato eseguito mediante la piattaforma MiSeq e l’analisi bioinformatica delle sequenze nucleotidiche mediante pipelines e workflows specifici per l’identificazione di mutazioni somatiche e germinali. Le mutazioni missenso sono state analizzate in silico mediante specifici softwares per prevedere la patogenicità delle varianti genetiche individuate. Risultati: Sono state identificate mutazioni germinali e somatiche in 47 biopsie provenienti da pazienti affetti da PA sottoposti a surrenectomia laparoscopica per la presenza di un adenoma surrenalico unilaterale. Le mutazioni missenso maggiormente presenti sono state identificate nel gene KCNJ5 (16%) e nel gene ATP1A1 (14%). Sono state inoltre identificate mutazioni frameshift, stop–gain, inserzioni e delezioni (delins) nei geni CTNNB1, ARMC5, ATP2B3 e CLCN2. Alcune di queste mutazioni germinali o somatiche sono state validate mediante sequenziamento Sanger. Conclusione: I risultati ottenuti dimostrano che le tecniche di sequenziamento NGS rappresentano una valida strategia per l’analisi delle varianti genetiche presenti nei pazienti affetti da APA e contribuiscono a consolidare la conoscenza relativa alle basi genetiche di tale patologia.