Analisi dei contatti reticolo endoplasmatico/mitocondri in linee cellulari di tumore mammario mediante l’uso della sonda ricombinante SPLICS RE-MT e la tecnologia splitGFP

Recentemente lo studio dei contatti che gli organelli cellulari stabiliscono tra di loro ha assunto un notevole interesse perché è emerso chiaramente che da questi contatti dipendono molti processi di scambio di molecole e di segnali che servono a garantire la corretta fisiologia cellulare. In particolare è stato dimostrato che i contatti tra reticolo endoplasmatico e mitocondri sono fondamentali per la regolazione del metabolismo energetico e per il corretto mantenimento dell’omeostasi cellulare. L’ obiettivo del lavoro sperimentale di questa tesi è indagare come e se il numero di contatti tra questi due organelli vari in tre diverse linee cellulari di tumore mammario comunemente utilizzate come modello di stadi diversi di progressione tumorale. Le cellule della linea MCF10A provengono da tessuto epiteliale umano mammario normale, le cellule MCF7 sono una linea cellulare epiteliale tumorale e rappresentano uno stadio precoce di tumore mammario e quelle della linea MDAMB231 provengono da una linea maligna immortalata di adenocarcinoma umano e rappresentano uno stadio avanzato di tumore. I contatti tra reticolo endoplasmatico e mitocondri sono stati visualizzati tramite l’espressione di una sonda ricombinante SPLICS, che sfrutta la tecnica di complementazione della fluorescenza della proteina splitGFP. Si è osservato che le diverse linee cellulari presentano un numero diverso dei contatti tra reticolo endoplasmatico e mitocondri probabilmente in relazione al loro diverso metabolismo energetico. Per verificare questa ipotesi abbiamo deciso di studiare se, in risposta al trattamento con 2-deossiglucosio (2DG) che porta ad un blocco della attività glicolitica, le tre linee cellulari rispondano con una rimodulazione dei contatti reticolo endoplasmatico/ mitocondri e lo facciano in maniera differenziata. Questa analisi contribuirà a chiarire i meccanismi alla base dello “shift” metabolico delle cellule tumorali.