Generazione di modelli cellulari mediante CRISPR-cas9 per lo studio del ruolo del gene RIN1 nella predisposizione al cancro papillare della tiroide di tipo familiare.

Il carcinoma papillare della tiroide (PTC) rappresenta la neoplasia più frequente in questa ghiandola endocrina. Negli ultimi anni, la componente genetica delle forme di PTC sporadico è stata ben caratterizzata; per le forme familiari, invece, non è si è ancora giunti all’identificazione e alla conferma di geni idonei a spiegarne l’eziologia. Fra i possibili candidati emersi dagli studi di whole exome sequencing condotti nel laboratorio di Genetica Umana, è stato selezionato il gene RIN1 (Ras and Rab interactor 1) in quanto tre soggetti affetti con uno stretto grado di parentela presentano una variante frameshift (798delC) nel sesto esone del gene con formazione di uno stop codon prematuro. Nel presente progetto, è stata utilizzata la tecnologia CRISPR-cas9 per generare un modello cellulare knock-out di RIN1. Il lavoro ha previsto la trasfezione del vettore plasmidico pSpCas9(BB)–2A-puro-(PX459) contenente le sgRNA nella linea cellulare Nthy-ori-3-1, la selezione delle linee clonali stabili e la verifica dell’assenza d’espressione di RIN1 a livello di mRNA e proteina. Si prevede di eseguire l’analisi funzionale dei cloni mediante test di proliferazione, attivazione di specifici pathway e trasfezione dei vettori plasmidici di espressione taggati all'N-terminale contenenti la sequenza di RIN1 wild-type e RIN1 con la mutazione di interesse 798delC.