Uso della sonda ricombinante SPLICS(ER-MT) per valutare i siti di contatto tra reticolo endoplasmatico e mitocondri in linee cellulari di tumore mammario che sovraesprimono la proteina DJ-1

Negli ultimi anni numerosi studi hanno evidenziato l’importanza dei contatti fisici e funzionali che si stabiliscono tra organelli cellulari, sia in condizioni fisiologiche, che patologiche. Di particolare interesse per il lavoro sperimentale della mia tesi di laurea è stata l’analisi dei siti di contatto tra reticolo endoplasmatico (ER) e mitocondri in tre diverse linee cellulari di tumore mammario a diversi stadi di progressione. Tali contatti sono stati visualizzati mediante l’utilizzo di una sonda ricombinante SPLICS che sfrutta la capacità di complementazione di due porzioni non fluorescenti della splitGFP, split green fluorescent protein, indirizzate rispettivamente alla membrana mitocondriale esterna e alla membrana del reticolo endoplasmatico. È stato osservato che nella linea cellulare MDAMB231, che rappresenta uno stadio avanzato di progressione tumorale, i contatti ER-mitocondri sono più numerosi rispetto alle cellule della linea MCF10A considerate come controllo non tumorale. È stata inoltre osservata una correlazione con i livelli di espressione di DJ-1, una proteina multifunzionale che svolge un ruolo nella stabilizzazione del contatto ER-mitocondri e, in particolare nell’ambito di cellule neoplastiche, è coinvolta nella citoprotezione contro lo stress ossidativo, favorendo eventi di sopravvivenza e inibendo la morte cellulare per apoptosi e la stabilizzazione dei contatti ER-mitocondri. L’obiettivo specifico della mia tesi è stato verificare se il silenziamento della proteina DJ-1 tramite l’utilizzo di un siRNA portasse ad una riduzione dei contatti ER-mitocondri nelle cellule di tumore mammario caratterizzate da elevati livelli espressione di DJ-1.