Effetto della sovraespressione di Mitofusina 2 e Plin5 sui contatti tra mitocondri e gocce lipidiche

L’obiettivo del mio tirocinio di tesi era ottenere una più approfondita conoscenza dei contatti tra organelli cellulari, in particolare tra mitocondri e gocce lipidiche. Lo studio in questione è stato condotto sovraesprimendo in cellule HeLa due proteine Mitofusina2 e Plin5 per le quali è stato ipotizzato un ruolo nel mediare i contatti tra mitocondri e gocce lipidiche. La sovraespressione è stata resa possibile grazie a tecniche di transfezione con plasmidi in cui è stato clonato il cDNA codificante queste proteine. Per la visualizzazione della corretta localizzazione ed espressione di queste proteine mediante tecniche immunocitochimiche è stato necessario inserire una sequenza tag contro la quale sono disponibili anticorpi commerciali, in particolare sono stati generati il costrutto Plin5 his-tag e il costrutto mitofusina 2 myc-tag. Per la visualizzazione di contatti ed è stata impiegata una sonda ricombinante basata sulla splitGFP e generata nel laboratorio dove ho svolto il mio periodo di tirocinio. I risultati fino ad ora ottenuti evidenziano un incremento statisticamente significativo dei contatti tra mitocondri e gocce lipidiche in seguito alla sovraespressione di Plin5 mentre per Mfn2 non si osservano differenze. Altri esperimenti dovranno essere condotti per una migliore caratterizzazione del ruolo di queste proteine nella regolazione di contatti tra mitocondri e gocce lipidiche.