Biologia sintetica in Acinetobacter baumannii: ottimizzazione di protocolli di trasformazione e progettazione di plasmidi per l’espressione di un sistema di CRISPR interference

La biologia sintetica fornisce degli strumenti metodologici innovativi per la concettualizzazione, progettazione e costruzione di sistemi biologici ingegnerizzati. Attraverso l’applicazione di un approccio ingegneristico alla biologia, vengono creati nuovi elementi genetici con struttura modulare, poi assemblati secondo determinati standards; in questo modo vengono creati circuiti genetici arbitrariamente complessi atti a modificare, in maniera quanto più predicibile possibile, il comportamento dei microorganismi ingegnerizzati da impiegare nei più svariati ambiti biotecnologici. L’organismo modello per eccellenza usato in biologia sintetica è Escherichia coli; tuttavia, a causa dell’impatto dell’aumento delle infezioni associate ad alcuni batteri multi-resistenti denominati ESKAPE, è sempre più necessario estendere quanto sviluppato per E.coli anche a questi batteri di particolare interesse sanitario. Il progetto MUTANS (iGEM UniPD Team) si pone come obiettivo lo sviluppo di un possibile approccio alla multi-resistenza antibiotica attraverso la biologia sintetica. In questa tesi verrà presentata parte dell’attività di ricerca del gruppo, con un particolare focus su Acinetobacter baumannii, ed in particolare sulle tecniche utilizzate per massimizzarne la trasformazione ed il silenziamento genico attraverso CRISPR/dCas9