Caratterizzazione di mutanti del gene CSNK2B connessi a POBINDS (sindrome di Poirier-Bienvenu)

Introduzione CK2 è una proteinchinasi tetramerica costituita da due subunità catalitiche α o α´e due subunità regolatorie β. E’ coinvolta in molte malattie umane, dove in genere ha aumentata espressione e attività, senza che ci siano mutazioni dei geni per le sue subunità. Viceversa, è stata recentemente scoperta una malattia neurologica caratterizzata da ritardo nello sviluppo ed epilessia, denominata sindrome del neurosviluppo di Poirier-Bienvenu (POBINDS), che è causata da mutazioni del gene per CK2β, CSNK2B. Le informazioni riguardo agli effetti biochimici di queste mutazioni sono ancora molto limitate; pertanto, tra gli scopi di questa tesi vi era quello di caratterizzare alcune mutazioni di CSNK2B trovate in pazienti italiani. Si sono inoltre studiate molecole che possano attivare CK2 per scopi terapeutici. Materiali e metodi Come modello cellulare sono state usate cellule CK2β(−/−) HEK-293AD, da cui ottenere cloni di cellule transfettate stabilmente con CK2β wild-type (WT) o con una delle mutazioni di CK2β. L’attività di CK2 è stata analizzata mediante western blot per vari substrati. Sono stati inoltre effettuati saggi di stabilità dei mutanti mediante trattamento cellulare con cicloesimide. Risultati Si sono ottenuti diversi cloni di cellule esprimenti stabilmente 5 mutanti di POBINDS. Alcuni mutanti, rispetto a CK2β WT, hanno mostrato ridotta attività e maggiore instabilità, probabilmente a causa di più rapida degradazione da parte del proteosoma. Inoltre, è stato visto che la proteina N di SARS-Cov2 è potenzialmente sfruttabile come attivatore di CK2. Conclusioni Alcune mutazioni di CSNK2B legate a POBINDS, ma non tutte, causano ridotta funzionalità di CK2. In questi casi, per stimolare CK2, può essere studiata la sequenza della proteina N di SARS-Cov2.