Impatto del glucosil-colesterolo sul recettore dei glucocorticoidi in una linea cellulare neuronale immortalizzata di topo

Il recettore dei glucocorticoidi (GR) è un recettore della superfamiglia dei recettori nucleari (NR) di fattori di trascrizione (TFs). È una proteina ubiquitaria che nel sistema nervoso è presente in diversi livelli di concentrazione a seconda della cellula. Questo recettore ha un ruolo nello sviluppo delle sinapsi, influenzano la neurotrasmissione e la plasticità delle cellule neuronali. Il Cholesterol β-D-glucoside (GlcCho) è una molecola che ha suscitato certo interesse nello studio delle malattie neurodegenerative in quanto sue alterazioni di questa sono state misutate in alcune malattie con sintomi neurologici o neurodegenerativi come la malattia di Gaucher e la malattia di Niemann-Pick tipo C. Lo scopo di questo esperimento era determinare se in un modello simil neuronale GR venisse attivato da GlcCho, comportandone la traslocazione nel nucleo. Esperimenti condotti in vitro indicano che un’interazione è possibile. Con questo dato preliminare intendevamo verificare se tale interazione si verificasse anche in cellule immortalizzate della linea NSC-34. È stato eseguito un Western blot per verificare il successo della trasfezione del DNA plasmidico, contenente il trascritto per GR fuso con la proteina fluorescente EGFP, nelle cellule NSC-34. Si è successivamente valutato il livello di espressione per singole cellule con diversi rapporti tra DNA e agente trasfettante per valutare quale fosse più efficace e permettesse una migliore visualizzazione della fluorescenza. Nel successivo esperimento le cellule trasfettate sono state esposte a diversi trattamenti (non trattato, GlcCho, Dexamethasone) e tramite osservazioni effettuate al microscopio a fluorescenza si è studiato il livello di traslocazione di GR trattato con GlcCho, utilizzando come controllo positivo il trattamento con Dexamethasone.