Adenocarcinoma gastrico EBV-associato: uno studio istopatologico e molecolare

Background Gastric adenocarcinoma is the fifth most common neoplasm and the fourth leading cause of cancer mortality worldwide. Epstein Barr Virus (EBV) associated gastric adenocarcinoma, in which the presence of EBV is identified in neoplastic cells, has a global incidence ranging from 75,000 to 90,000 cases per year. Having a high lymphocytic infiltrate and high expression of PD-L1, this subtype is of particular clinical interest for the purpose of evaluating the response to immune checkpoint inhibitor drugs. Aim of the study The purpose of this study was to describe the clinical, pathological and molecular characteristics of patients with EBV-associated gastric adenocarcinoma, evaluating the biomarkers and genetic alterations that can serve to understand the biology of these tumors and to better define the choice of personalized therapy. Materials and Methods In this multicenter retrospective study, 38 surgical specimens and 3 biopsies from patients with EBV-associated gastric adenocarcinoma were evaluated. Cases were re-evaluated according to WHO 2019 criteria. In a subgroup (n= 23), the presence of a Helicobacter pylori infection was investigated by polimerase chain reaction (PCR). The intratumoral lymphocytic infiltrate (TILs) was also quantified. Samples were evaluated for EBV positivity by in situ hybridization and immunohistochemical (IHC) analysis was also conducted for DNA mismatch repair (MMR) proteins, PD-L1, HER2, CLDN18.2, p53. Finally, extensive molecular profiling was performed using the AmoyDX Master Panel kit which allows the analysis of both DNA and RNA evaluating 571 genes and 2396 transcripts. Results Fourteen patients (34.1%) were female, twenty-seven (65.9%) male and the average age at diagnosis was 66.6y. The majority of tumors were located in the body-fundus (48.8 %), with seven cases (18.9%) at the gastro-esophageal junction. The two most represented histotypes were gastric carcinomas with lymphoid stroma (43.9%) and tubular adenocarcinomas (34.1%). 18/23 tumors analyzed by PCR were positive for Helicobacter pylori. Most EBV-associated gastric adenocarcinomas were proficient in MMR (94.9%), all expressed PD-L1 with CPS≥1, (94.4% with CPS ≥10) and only two cases (5.1%) presented strong positivity (3+) for HER2. More than half (64.9%) were positive for CLDN18.2 expression, and the majority (75.7%) showed p53 wild type expression. The most altered genes at comprehensive genomic profiling were PIK3CA (35.1%), CHEK2 (21.6%) and ARID1A (13.5%). High TMB values were found in 21.6% of cases analyzed. Two cases with MSI exhibited methylation in the MLH1 gene promoter. Conclusions EBV-associated gastric adenocarcinomas have peculiar clinical-pathological characteristics, in terms of stage at diagnosis, location and histotype. Furthermore, they present specific molecular characteristics in terms of expression of biomarkers and gene alterations. Of exceptional significance is the presence of two cases with a concomitant deficiency in the MMR complex (due to MLH1 promoter methylation).

Introduzione L’adenocarcinoma gastrico è la quinta neoplasia più frequente e la quarta causa di mortalità per patologia oncologica al mondo. L’adenocarcinoma associato al virus di Epstein Barr (EBV), in cui si identifica la presenza dell’EBV nelle cellule neoplastiche, presenta un’incidenza globale che va dai 75 000 ai 90 000 casi all’anno. Avendo un elevato infiltrato linfocitario ed alta espressione di PD-L1, questo sottotipo è di particolare interesse clinico allo scopo di valutare la risposta a farmaci inibitori del check-point immunitario. Scopo dello studio Lo scopo di questo studio è stato quello di descrivere le caratteristiche clinico-patologiche e molecolari di pazienti con adenocarcinoma gastrico EBV-associato, valutando i biomarcatori e le alterazioni genetiche che possono servire a comprendere la biologia di queste neoplasie e a meglio definire la scelta di una terapia personalizzata. Materiali e Metodi In questo studio retrospettivo multicentrico sono stati valutati 38 pezzi operatori e 3 biopsie di pazienti con adenocarcinoma gastrico EBV-associato. I casi sono stati rivalutati istologicamente, secondo la classificazione WHO 2019. In alcuni casi (n=23), è stata valutata mediante PCR la presenza di Helicobacter pylori (la valutazione è ancora in corso per alcuni campioni) ed è stato inoltre quantificato l’infiltrato linfocitario intratumorale (TILs). I campioni sono stati valutati per la positività a EBV mediante ibridazione in situ, ed è stata, inoltre, condotta un’analisi immunoistochimica (IHC) per le proteine del meccanismo di riparazione del DNA mismatch repair (MMR), PD-L1, HER2, CLDN18.2, p53. Infine, è stata eseguita una profilazione molecolare estesa utilizzando il kit AmoyDX Master Panel che consente l’analisi sia del DNA valutando 571 geni sia dell’RNA valutando 2396 trascritti. Risultati Quattordici pazienti (34,1%) erano di sesso femminile; l’età media alla diagnosi era di 66,6 anni. La maggior parte delle neoplasie erano localizzate nel corpo-fondo (48,8%), con sette casi (18,9%) alla giunzione gastro-esofagea. I due istotipi più rappresentati sono stati i carcinomi gastrici con stroma linfoide (43,9%) e gli adenocarcinomi tubulari (34,1%). 18/23 neoplasie analizzate tramite PCR per sono risultate positive alla ricerca dell’Helicobacter pylori. La maggior parte dei casi sono risultati MMR proficient (MMRp, 94,9%), tutti hanno espresso PD-L1 con CPS≥1, (94,4% con CPS ≥10) e solo due casi (5,1%) hanno presentato forte positività (3+) per HER2. Più della metà (64,9%) sono risultati positivi per l’espressione di CLDN18.2 e la maggior parte (75,7%) hanno mostrato espressione di p53 non aberrante. L’analisi molecolare mostra mutazioni prevalentemente a carico di PIK3CA (35,1%), CHEK2 (21.6%) e ARID1A (13.5%). Alti valori di TMB sono stati riscontrati nel 21.6% dei casi analizzati. Due casi con MSI hanno presentato metilazione nel promotore di MLH1. Conclusioni Gli adenocarcinomi gastrici EBV associati hanno delle caratteristiche clinico-patologiche peculiari, in termini di stadio alla diagnosi, localizzazione e istotipo. Inoltre, presentano delle caratteristiche molecolari specifiche in termini di espressione di biomarcatori e alterazioni geniche. Di eccezionale riscontro è la presenza di due casi con concomitante presenza di alterazione del complesso MMR.