Studio del profilo immunitario T linfocitario nella Trombocitopenia Immune (ITP)

Background. Immune thrombocytopenia (ITP) is a rare acquired hematological disorder characterized by immune-mediated platelet destruction, associated with significant morbidity and mortality due to bleeding, fatigue, and treatment-related complications. The pathogenic complexity of ITP explains the considerable phenotypic variability of the disease. Although traditionally considered an antibody-mediated condition, various pieces of evidence suggest alternative mechanisms mediating platelet depletion. Evidence has been provided of an involvement of T lymphocytes in mediating platelet destruction, yet a clear picture of the role of different T cell subpopulations, particularly C8+ cells, is far from being defined. Study aims. This study aims to delve into the immunophenotypic and functional patterns of T lymphocytes in patients with ITP, divided into two main objectives: (i) compare the distributions of T cell subsets between ITP patients and healthy controls and compare subgroups of ITP patients with different disease characteristics; (ii) investigate the functional aspects of T lymphocytes between ITP patients and controls, and explore the significance of TCR clonality in ITP. Materials & Methods. This monocentric observational study plans to prospectively enroll a cohort of 50 ITP patients from the “Hematology and Clinical Immunology” and “Internal Medicine I” Units of the University Hospital of Padua, starting from 01/05/2024, matched with a group of 25 healthy controls. After retrospectively collecting data from medical records regarding diagnosis and disease history, the enrolled patients will be followed for 2 years to gather clinical and therapeutic data and obtain blood samples for laboratory investigations not included in clinical practice. The protocol is currently open and recruiting; thus, the presented results are a preliminary analysis concerning patients (n=24) and controls (n=10) enrolled up to 31/05/2024. Following enrollment, patients and healthy controls underwent blood sampling for detailed flow cytometric analysis of T cell populations. The results were then compared among ITP patient subgroups identified using a database containing retrospectively collected data on disease history and treatment lines, and between ITP patients and healthy controls. Results. The comparison of data obtained from flow cytometric analysis revealed a decrease in the CD4+/CD8+ ratio (1.84 vs. 2.03) and an increase in CD8+ TEMRA lymphocytes (24.3% vs. 11.1%) in ITP patients compared to healthy controls, which were not statistically significant. Refractory ITP patients showed a significantly higher percentage of CD8+ TSCM lymphocytes (2.29%) compared to non-refractory patients (1.24%, p=0.0484). In the comparison between splenectomized and non-splenectomized patients, statistically significant differences emerged: naive CD4+ T lymphocytes (14.5% vs. 48.9%; p=0.00226) and CD8+ T lymphocytes (9.4% vs. 22.2%; p=0.0365) were decreased, while CD4+ TEM lymphocytes (14.9% vs. 7.6%; p=0.0228) were increased. Conclusions. With all the limitations of small numbers, our data point out to an immune imbalance in the T cell compartment, particularly of CD8+ T cells, in ITP patients compare to healthy controls. The increase in CD8+ TSCM cells in refractory ITP patients supports the association of this lymphocyte subset with the persistence of an autoreactive condition. In splenectomized patients, specific immune patterns were identified, which could contribute to achieving a state of disease remission. Despite being a preliminary analysis, the results provide promising foundations for continuing the study and conducting further investigations.

Presupposti dello studio. La trombocitopenia immune (ITP) è un raro disordine ematologico acquisito caratterizzato dalla distruzione immuno-mediata delle piastrine, ed associato a significativa morbilità e mortalità a causa di emorragie, affaticamento e complicanze legate al trattamento. La complessità patogenetica dell’ITP giustifica la notevole variabilità fenotipica della malattia. Sebbene sia tradizionalmente considerata una patologia anticorpo-mediata diverse evidenze suggeriscono l’esistenza di meccanismi immunologici alternativi responsabili della deplezione piastrinica. Tra questi l’immunità T-mediata sembra svolgere un ruolo di primo piano, tuttavia con necessità di definire con maggiore precisione quale sia il contributo patogenetico delle diverse sottopopolazioni T linfocitarie, in particolare dei linfociti T CD8+. Scopo dello studio. Il presente studio si propone di approfondire i pattern immunofenotipici e funzionali dei linfociti T in pazienti con ITP, articolandosi in due parti con i seguenti scopi: (i) Confrontare le distribuzioni delle sottopopolazioni T tra pazienti con ITP e controlli sani e paragonare sottogruppi di pazienti con ITP con diverse caratteristiche di malattia; (ii) Indagare gli aspetti funzionali dei linfociti T tra pazienti con ITP e controlli e approfondire il significato della clonalità del TCR nella ITP. Materiali e metodi. Questo studio osservazionale monocentrico prevede di arruolare prospetticamente a partire dal 01/05/2024 una coorte di 50 pazienti affetti da ITP afferenti alle UOC “Ematologia” e “Clinica Medica I” dell’Azienda Ospedale-Università di Padova, abbinati con un gruppo di 25 controlli sani. Dopo aver raccolto retrospettivamente dati da cartelle cliniche inerenti diagnosi e storia di malattia, i pazienti arruolati saranno seguiti per 2 anni per raccogliere dati clinico-terapeutici e ottenere campioni ematici per approfondimenti laboratoristici non previsti nella pratica clinica. Il protocollo è attualmente aperto e in fase di reclutamento; di conseguenza, i risultati presentati sono un'analisi preliminare relativa ai pazienti (n=24) e ai controlli (n=10) arruolati fino al 31/05/2024. In seguito all’arruolamento, i pazienti ed i controlli sani sono stati sottoposti a prelievi ematici per studio citofluorimetrico approfondito delle popolazioni T. I risultati ottenuti sono stati poi confrontati tra i sottogruppi di pazienti con ITP individuati adoperando un database, ottenuto con i dati raccolti retrospettivamente riguardanti storia di malattia e linee terapeutiche, e tra pazienti con ITP e controlli sani. Risultati. Dal confronto dei dati ottenuti dall’analisi citofluorimetrica sono emersi una diminuzione del ratio CD4+/CD8+ (1.84 vs 2.03) e un aumento dei linfociti TEMRA CD8+ (24.3% vs 11.1%) nei pazienti con ITP rispetto ai controlli sani, pur senza significatività statistica. I pazienti con ITP refrattaria hanno mostrato una percentuale di linfociti TSCM CD8+ (2.29%) significativamente superiore (p=0.0484) rispetto a quelli non refrattari (1.24%). Nella comparazione tra pazienti splenectomizzati e non splenectomizzati sono emerse differenze statisticamente significative: i linfociti T naive CD4+ (14.5% vs 48.9%; p=0.00226) e CD8+ (9.4% vs 22.2%; p=0.0365) risultano diminuiti a fronte di un aumento dei linfociti TEM CD4+ (14.9% vs 7.6%; p=0.0228). Conclusioni. Con i limiti legati alla scarsa numerosità del nostro campione, i nostri dati suggeriscono la presenza di uno squilibrio immunitario nel compartimento T linfocitario, in particolare per quanto riguarda i linfociti CD8+, nei pazienti con ITP rispetto ai controlli sani. L'incremento di cellule TSCM CD8+ nei pazienti con ITP refrattaria fanno ipotizzare un’associazione tra questa sottopopolazione e la persistenza di una condizione autoreattiva.