The Western blot is a laboratory technique that allows for the specific identification and characterization of proteins. This technique was optimized in George Stark's laboratory at Stanford, while the name "Western blot" was coined in 1981 by W. Neal Brunette. The Western blot involves the separation of proteins through SDS-PAGE gel electrophoresis and subsequently electrotransfer onto a nitrocellulose membrane, which is then incubated with specific antibodies. The presence of antibodies enables the recognition and identification of the protein of interest. This is an important and routine method for protein analysis, suitable for the semi-quantitative or qualitative identification of specific proteins and their molecular weights from a complex mixture. Despite its age, this technique is still widely used in biochemical and clinical laboratories. The Western blot has proven essential in the study of human Brody disease and bovine congenital pseudomyotonia, as it has allowed for the identification and analysis of SERCA1 protein expression, revealing that this protein is under-expressed and misfolded in both conditions.
Il Western blot è una tecnica di laboratorio che permette l’identificazione e la caratterizzazione specifica delle proteine. Tale tecnica è stata ottimizzata nel laboratorio di George Stark a Stanford, mentre il nome Western blot gli viene assegnato nel 1981 da W.Neal Brunette.Il western blot prevede che le proteine vengano separate mediante elettroforesi su un gel SDS-PAGE e successivamente trasferite elettroforeticamente su una membrana di nitrocellulosa che viene incubata con anticorpi specifici. Le presenza di anticorpi permette il riconoscimento e l’identificazione della proteina di interesse. Questo è un metodo importante e di routine per l’analisi delle proteine ed è sfruttabile per l’identificazione semiquantitiativa o qualitativa di proteine specifiche e del loro peso molecolare da una miscela complessa. Questa tecnica, per quanto antica, risulta ancora largamente utilizzata nei laboratori biochimici e clinici. Il Western blot si è rivelato essenziale nello studio della malattia di Brody umana e della pseudomiotonia congenita bovina, poiché ha permesso l'identificazione e l'analisi dell'espressione della proteina SERCA1 dalla quale si è constatato che tale proteina è sotto espressa e presenta una conformazione errata nelle due patologie.
Utilizzo della tecnica Western blotting per lo studio dell'espressione della proteina SERCA1 che causa una miopatia congenita nei bovini omologa alla miopatia umana di Brody.
FRANZIN, SERENA
2023/2024
Abstract
The Western blot is a laboratory technique that allows for the specific identification and characterization of proteins. This technique was optimized in George Stark's laboratory at Stanford, while the name "Western blot" was coined in 1981 by W. Neal Brunette. The Western blot involves the separation of proteins through SDS-PAGE gel electrophoresis and subsequently electrotransfer onto a nitrocellulose membrane, which is then incubated with specific antibodies. The presence of antibodies enables the recognition and identification of the protein of interest. This is an important and routine method for protein analysis, suitable for the semi-quantitative or qualitative identification of specific proteins and their molecular weights from a complex mixture. Despite its age, this technique is still widely used in biochemical and clinical laboratories. The Western blot has proven essential in the study of human Brody disease and bovine congenital pseudomyotonia, as it has allowed for the identification and analysis of SERCA1 protein expression, revealing that this protein is under-expressed and misfolded in both conditions.File | Dimensione | Formato | |
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