ESPRESSIONE E PURIFICAZIONE DI NANOBODIES INGEGNERIZZATI ANTI SERPINA B3 (SCCA-1) IN PICHIA PASTORIS: VERSO UN MIGLIORAMENTO DELLA DIAGNOSTICA ONCOLOGICA

Nanobodies are small antibody fragments derived from camelids, characterized by their small size, high stability, simple structure, and ability to bind with high specificity to their molecular targets, properties that enable numerous applications in biomedical fields. In this project, nanobodies specific for human Serpin B3 were engineered. Serpin B3 plays the role of a serine protease inhibitor protein, which is over-expressed in some forms of cancer such as hepatocarcinoma and squamous cell carcinoma. The ultimate goal of the project in which this thesis is embedded is to develop a diagnostic tool for ELISA and immunohistochemistry assays. Seven nanobodies engineered against Serpin B3, expressed in Pichia Pastoris, an optimal system for genomic integration and production of nanobodies in secreted form, were selected. The nanobodies were purified by affinity chromatographic and size exclusion techniques.

Nanobodies sono piccoli frammenti di anticorpi derivati da camelidi, caratterizzati da dimensioni ridotte, alta stabilità, struttura semplice e capacità di legarsi con elevata specificità ai propri bersagli molecolari, proprietà che permettono numerose applicazioni in ambito biomedico. In questa progetto si sono ingegnerizzati nanobodies affini a Serpina B3 umana. Quest'ultima svolge il ruolo di proteina inibitrice di serin-proteasi, sovra espressa in alcune forme tumorali come epatocarcinoma e carcinoma delle cellule squamose. Lo scopo ultimo del progetto in cui questa tesi si inserisce è quello di sviluppare uno strumento diagnostico per saggi ELISA e di immunoistochimica. Sono stati selezionati 7 nanobodies ingegnerizzati contro Serpina B3, espressi in Pichia Pastoris, un sistema ottimale per l'integrazione genomica e la produzione di nanobodies in forma secreta. I nanobodies sono stati purificati mediante tecniche cromatografiche di affinità ed esclusione dimensionale.