Tecniche di amplificazione e analisi del DNA in riferimento ai test genetici preimpianto PGT

Preimplantation Genetic Testing (PGT), associated with assisted reproductive technology cycles, is the earliest available test for detecting genetic disorders in embryos, as it can be conducted just five days after fertilization. These methods involve the use of DNA amplification technologies (necessary due to the small number of cells, and consequently, the limited amount of genetic material that can be extracted) and nucleotide analysis for identifying genetic variations such as point mutations and Copy Number Variations (CNV), as well as chromosomal abnormalities including numerical and structural alterations. This work is divided into several chapters, beginning with an overview of the key roles of the Clinical Engineering Service (CES), where I completed my internship at the University Hospital of Padua, which houses the PGT-Unit laboratories. The subsequent chapters will introduce genetic variations and then explore the techniques for amplifying and analyzing genetic material. Specifically, they will cover amplification techniques related to PCR (Polymerase Chain Reaction) and massive parallel sequencing methods known as NGS (Next Generation Sequencing).

I test genetici preimpianto (Preimplantation Genetic Testing, PGT) che vengono associati ai cicli di procreazione medicalmente assistita, sono i primi test effettuabili per identificare patologie genetiche nell’embrione dal momento che si possono realizzare già dopo cinque giorni dalla fecondazione. Le metodologie prevedono l’implementazione di tecnologie legate all’amplificazione del DNA (necessarie per la ridotta quantità di cellule, e quindi materiale genetico, prelevabili), e analisi dei nucleotidi, per la detection di variazioni genetiche quali le mutazioni puntiformi e le Copy Number Variation (CNV), o di alterazioni cromosomiche quali le alterazioni numeriche o strutturali. Il presente elaborato si compone di diversi capitoli, di cui il primo volto a esporre i ruoli fondamentali del Servizio di Ingegneria Clinica (SIC), presso il quale ho svolto l’attività di tirocinio all’interno dell’Azienda Ospedale-Università di Padova, presso la quale sono collocati i laboratori PGT-Unit. I successivi capitoli, dopo un’introduzione sulle variazioni genetiche, esporranno le tecniche di amplificazione e analisi del materiale genetico. In particolare, verranno esposte: tecniche di amplificazione legate alla PCR (Polymerase Chain Reaction) e tecniche di sequenziamento massivo parallelo NGS (Next Generation Sequencing).