Uso di sonde ricombinanti SPLICS per lo studio dei contatti tra mitocondri e goccioline lipidiche in una linea cellulare di epatociti esposta a diverse condizioni metaboliche

I siti di contatto tra gli organelli cellulari sono definiti come l’area in cui le membrane di due organelli sono in giustapposizione ad una distanza tra i 10-100nm e sono fondamentali per la comunicazione inter-organello e il mantenimento dell’omeostasi cellulare. In particolar modo, i contatti tra goccioline lipidiche e mitocondri svolgono diverse funzioni: favoriscono il trasporto degli acidi grassi verso i mitocondri per la loro ossidazione, supportando il metabolismo cellulare, e contribuiscono alla crescita delle goccioline in condizioni di surplus lipidico, fungendo da riserva e protezione contro la tossicità degli acidi grassi liberi. In questo progetto di tesi i contatti tra goccioline lipidiche e mitocondri sono stati studiati utilizzando la sonda ricombinante SPLICS, che si compone di due frammenti della split-GFP, le porzioni GFP1-10 e GFP11, espresse specificamente sulla membrana mitocondriale esterna e sul monostrato fosfolipidico delle goccioline lipidiche, grazie all’aggiunta di specifiche sequenze di localizzazione. Quando i due frammenti si trovano sufficientemente vicini si ha emissione di fluorescenza, previa eccitazione. L’obbiettivo del mio progetto di tesi era monitorare e quantificare i contatti tra goccioline lipidiche e mitocondri, in una linea cellulare di epatociti esposta a condizioni metaboliche differenti, quali deprivazione di nutrienti e sovraccarico di acidi grassi. Avendo utilizzato due sonde SPLICS, caratterizzate da due diverse sequenze di direzionamento alle goccioline lipidiche, abbiamo ipotizzato che i due trattamenti potessero evidenziare una diversa risposta cellulare a seconda della popolazione di goccioline lipidiche coinvolta nella formazione di contatti con i mitocondri.