Implementazione di un sistema basato sulla chemiluminescenza per la quantificazione dei livelli di espressione dei microRNA

Questa tesi verte sulla quantificazione dei livelli di espressione del miR-210 in diverse linee di D. melanogaster allo scopo di valutare l’efficacia di un sistema innovativo basato sulla chemiluminescenza che promette, grazie all’utilizzo di sonde specifiche, di rilevare e quantificare l’espressione di microRNA (miRNA) con elevate sensibilità e specificità. Per poter eseguire le analisi è stato innanzitutto necessario generare una linea di Drosophila over-esprimente il miR-210, la quale ci ha permesso di eseguire un confronto, in termini di espressione, con una linea di controllo e con il genotipo knock-out per tale miRNA. Sono stati analizzati sia campioni di RNA totale che campioni costituiti dalla fase acquosa ottenuta per separazione delle fasi in seguito ad estrazione in fenolo-cloroformio. L’efficacia della tecnica in esame è stata valutata confrontandone i risultati con quelli ottenuti dalla quantificazione del medesimo miRNA con un metodo ampiamente consolidato, la quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR). Sebbene i risultati ottenuti non siano paragonabili a quelli prodotti con la qRT-PCR, sia a partire da RNA totale che da fase acquosa, tale kit, per la facilità di utilizzo e di interpretazione dei risultati, potrebbe avere una sua utilità nel rilevare la presenza/quantità di miRNA in un contesto clinico.