Validazione di linee cellulari esprimenti microRNA coinvolti nel metabolismo cellulare

Il muscolo scheletrico è il tessuto responsabile dei movimenti volontari di testa, tronco e arti ed è, come tutti gli altri tessuti, soggetto a invecchiamento. Tra le cause di invecchiamento si è scoperto esserci l’azione dei miRNA, che sono trascritti endogeni corti implicati principalmente nella regolazione dell’espressione genica. Inoltre, durante l’invecchiamento dei tessuti, i mitocondri, i principali motori energetici del muscolo, subiscono alterazioni morfo-funzionali. In base ad analisi di letteratura, sono stati scelti una serie di miRNA che sono coinvolti nell’invecchiamento per valutare il loro impatto sulla morfologia e funzione dei mitocondri. Per valutare l’impatto dei miRNA sui mitocondri sono state create delle linee cellulari di mioblasti di topo (C2C12) che sovra esprimono i miRNA scelti. Prima di analizzare l’impatto dei miRNA sui mitocondri si è proceduto con la validazione della loro sovra espressione nelle cellule. La validazione è stata fatta tramite la tecnica qPCR che prevede di estrarre l’RNA dalle cellule, retrotrascriverlo e utilizzarlo nella reazione di PCR quantitativa. La verifica di espressione dei miRNA di interesse permette di selezionare le linee cellulari con una sovra espressione rilevante del miRNA in modo tale da studiare come questo impatti sui mitocondri e sull’invecchiamento muscolare.