Analisi della gestione e del monitoraggio sanitario di un modello di stabulario: un caso di contaminazione da Entamoeba spp.

The animal facility is a place where the experimental animals, mostly mice, are bred or housed. Animal testing is regulated by the Directive 2010/63/EU on the protection of animals used for scientific purposes. The facilities must be designed, built, managed and monitored in accordance with certain requirements. A Health Monitoring Program should be created in order to organize health checks. This thesis analyzes the University Enclosure "A". Until March 2023, this facility was classified as Specific Pathogen Free. Its peculiarity was precisely the fact of being able to preserve its sanitary status despite its structural adjacency to a conventional animal facility. The aim of this thesis was initially to analyze the sanitary management and the monitoring procedures which allowed to maintain a microbiological separation between the two structures. However, during the last copromicroscopic analyses, carried out every six months on sentinel mice, some Racks were positive for Entamoeba spp. The diagnosis was confirmed by further copromicroscopic examinations. The cause of contamination was identified with an erroneous use of the autoclave during water sterilization, which allowed the entry of Entamoeba spp. and prevented its elimination. The procedural error was corrected. A faecal sampling plan was programmed for each row of each Rack of the animal enclosure. A PCR was developed to identify positivity more quickly and efficiently. Then, the positivity was confirmed with sequencing. The positive animals were removed from the facility. Currently, it is planned to carry out PCRs on sentinel mice of each Rack, to further confirm what emerged from the previous analyses. The next six-month monitoring will show the definitive confirmation of the successful eradication of Entamoeba spp. It has been hypothesized, consulting the literature, that the microorganism at issue was Entamoeba muris or Entamoeba coli. However, it was not possible to identify the species with certainty, using molecular analyses.

Lo stabulario è il luogo in cui si allevano o si ospitano gli animali necessari allo svolgimento degli esperimenti. Essi sono per la maggior parte topi. La sperimentazione animale è regolamentata dalla Direttiva 2010/63/UE, che tutela il benessere degli animali da laboratorio. Gli stabilimenti devono essere progettati, costruiti, gestiti e monitorati rispettando determinati requisiti. I controlli sanitari devono essere programmati sviluppando un Health Monitoring Program. L’oggetto di osservazione e studio di questa tesi è lo Stabulario Universitario “A”. Esso, fino a marzo 2023, era classificato come Specific Pathogen Free. La sua particolarità era proprio quella di riuscire a conservare il suo stato sanitario nonostante la sua adiacenza strutturale a uno stabulario convenzionale. Inizialmente l’obiettivo della tesi era quella di analizzare le procedure di gestione e di monitoraggio sanitario che consentivano di mantenere una separazione microbiologica tra i due stabulari. Durante le analisi copromicroscopiche semestrali effettuate sui topi sentinella, però, alcuni Rack sono risultati positivi a Entamoeba spp. La diagnosi è stata confermata attraverso ulteriori esami copromicroscopici. La causa di contaminazione è stata identificata con un erroneo utilizzo dell’autoclave durante le operazioni di sterilizzazione dell’acqua, che ha consentito l’ingresso e la mancata eliminazione di Entamoeba spp. L’errore procedurale è stato corretto. È stato programmato un piano di campionamenti fecali di ogni fila di ciascun Rack dello stabulario. È stata elaborata una PCR per individuare in maniera più rapida ed efficiente le positività, confermate poi con il sequenziamento. Gli animali positivi sono stati allontanati dalla struttura. Attualmente, è in programma la realizzazione di PCR sulle feci dei topi sentinella di ciascun Rack, per confermare ulteriormente quanto emerso dalle analisi precedenti. Al prossimo monitoraggio semestrale si avrà la conferma definitiva dell’avvenuta eradicazione di Entamoeba spp. Si è ipotizzato, consultando la letteratura, che il microrganismo in questione fosse Entamoeba muris o Entamoeba coli. Con le analisi molecolari, però, non è stato possibile identificare la specie con certezza.