Studio della struttura secondaria dell’RNA messaggero della proteina Timidilato Sintasi tramite spettroscopia di forza

La timidilato sintasi (TS) è una proteina chiave coinvolta nel ciclo dei folati, e pertanto essenziale per la replicazione e riparazione del DNA nelle cellule. L’inibizione di questa sua funzione catalitica porta infatti alla morte cellulare e per tale motivo TS rappresenta un target noto e validato per la terapia contro il cancro. Purtroppo, il farmaco maggiormente usato contro TS nel trattamento di tumori solidi, il 5-fluorouracile (5-FU), nel tempo porta all’insorgere di fenomeni di farmaco-resistenza, che limitano l’efficacia del medicinale in ambito clinico. Tali effetti avversi sono dovuti principalmente al fatto che 5-FU interferisce con un’altra funzione chiave di TS, ossia la sua capacità di legare con un’alta affinità il proprio RNA messaggero (TSmRNA) e regolare direttamente la propria biosintesi con un meccanismo di autoregolazione traduzionale a feedback. Queste evidenze hanno portato alla necessità di studiare più in dettaglio l’interazione tra TS e il suo mRNA e, in primo luogo, la struttura secondaria di quest’ultimo. In questo lavoro di tesi saranno usate le pinzette ottiche per eseguire misure di spettroscopia di forza su singole molecole di TSmRNA, per studiarne la struttura secondaria e i principali parametri elastici ed energetici. Gli esperimenti saranno realizzati in soluzioni saline contenenti diverse concentrazioni di fosfato, per studiare la possibile influenza di questo elemento sulla struttura di TSmRNA.